[发明专利]两步法同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物提取分离技术领域，具体涉及一种两步法同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法。

背景技术

救必应为冬青科植物铁冬青Ilex rotunda Thunb.的干燥树皮，始载于《岭南采药录》，又名白木香、羊不吃、白沉香等。铁冬青生长于山下疏林或沟、溪边，分布于江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东、广西、云南，为我国南方民方常用草药。具有清热解毒，利湿止痛的功效，常用于治疗暑湿发热，咽喉肿痛，湿热泻痢，脘腹胀痛，风湿痹痛，湿疹，疮疖，跌打损伤。

在救必应较多的活性成分中，尤以长梗冬青苷和紫丁香苷含量较高且活性突出。长梗冬青苷又叫具栖冬青苷、救必应甲素，是五环三萜类化合物。分子式C₃₆H₅₈O₁₆，分子量658.86，具有清热解毒，消肿止痛。用于感冒，扁桃体炎，咽喉肿痛，急性胃肠炎，风湿骨痛；外用治跌打损伤，痈疖疮疡，外伤出血，烧烫伤。另有文献报道其具有降总胆固醇和总脂的作用。紫丁香苷又叫丁香苷、刺五加苷B、祖师麻丙素、救必应乙素、救必应甲苷，是苯丙素类化合物，分子式C₁₇H₂₄O₉，分子量372.36，微溶于冷水，稍溶于丙酮，溶于热水、甲醇、乙醇，几乎不溶于乙醚、苯、氯仿，具有抗炎、镇痛和抗肿瘤作用，常用于止血和抗肝毒药。

目前，少有从救必应中同时快速提取长梗冬青苷和紫丁香苷两个成分的报道。单一成分提取工艺较多，一般从救必应、刺五加、雪莲药材中提取纯化得来，多是采用低碳醇或丙酮提取，纯化也多采用萃取或大孔树脂吸附后再硅胶柱分离，过程漫长且目标化合物损失较多，操作步骤繁多且有机试剂特别毒性试剂使用较多，对操作人员危害大，环境污染严重。

专利CN101307079公开了一种从铁冬青中提取分离紫丁香苷的方法，是将药材粉碎成细粉，用苯回流提取，将提取后的药渣晾干，加入丙酮回流提取，浓缩提取液，静置析出，用丙酮洗涤析出物，将析出物用丙酮-甲醇的混合溶液反复重结晶，最后再用甲醇重结晶，即可得到紫丁香苷的白色针晶。此法所用溶剂的毒性较大。

专利CN101033245公开了一种具栖冬青苷的制备方法及应用，是取救必应粗粉，用乙醇回流提取，获得长梗冬青苷且纯度为98％，但损失了紫丁香苷。

综上所述，在提取分离长梗冬青苷和紫丁香苷的过程中，普遍存在长梗冬青苷和紫丁香的流失大、纯化过程漫长、溶剂残留毒性大、成本较高的问题。因此，有必要寻找一种既简便又安全地提取纯化长梗冬青苷和紫丁香苷的方法。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种两步法同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法，该方法操作简单、安全有效，制备的长梗冬青苷和紫丁香苷含量大，纯度高。

本发明是通过以下技术方案来实现：

两步法同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法，包括以下步骤：

1）按1g：6～18ml的料液比，向救必应药材中加入体积分数为20～70%的乙醇水溶液，回流提取，收集提取液，浓缩至提取液浓度为0.10～0.25g/mL后，静置，然后过滤，分别收集滤液和滤渣；

2）将滤渣干燥，得到长梗冬青苷粗品，将长梗冬青苷粗品纯化后，得到长梗冬青苷；

3）将滤液通过大孔吸附树脂进行柱层析分离，以乙醇-水体系作为洗脱剂进行梯度洗脱，收集体积分数为10～50%的乙醇水溶液的洗脱组分，对该洗脱组分浓缩、干燥，得到紫丁香苷粗品，将紫丁香苷粗品纯化后，得到紫丁香苷。

步骤1）所述的回流提取次数为1～3次，每次30～120min。

步骤3）所述的大孔吸附树脂的型号为NKA-II、XDA-1、NKA-9或JTY-1。

步骤3）所述的用体积分数为10～50%的乙醇水溶液的梯度洗脱，每个梯度洗脱1～5倍柱体积。

步骤2）和3）所述的纯化采用重结晶或柱层析法对长梗冬青苷粗品及紫丁香苷粗品进行纯化。

所述的重结晶采用的溶剂为甲醇、乙醇、丙酮或它们的水溶液。

所述的重结晶是将长梗冬青苷粗品或紫丁香苷粗品溶于所述的重结晶溶剂中，在50～70℃水浴中使其达到过饱和溶液，再在室温下，静置24～60h后析出结晶，将结晶过滤、干燥，得到纯化的紫丁香苷或长梗冬青苷。