[发明专利]防治苹果果实轮纹病的生防菌娄彻氏链霉菌A-1及其生防制剂

权利要求书

1.一种防治苹果果实轮纹病的生防菌娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)A‐1，于2012年1月12日保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO:M2012008。

2.一种利用权利要求1所述的娄彻氏链霉菌(Streptomyces rochei)A‐1制备的生防菌剂。

3.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于用于防治苹果果实轮纹病。

4.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于所述生防菌剂的制备方法如下：

1）培养基的制备：

高氏一号培养基：可溶性淀粉20g，KNO₃1.0g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.5g，FeSO₄·7H₂O0.01g，琼脂15‐20g，蒸馏水1000mL，pH7.2‐7.4，121℃高压蒸汽灭菌20min；

发酵培养基：黄豆饼粉10.0g，葡萄糖10.0g，NaCl2.5g，CaCO₃2.0g，蛋白胨3.0g，蒸馏水1000mL，pH值调节为7.0‐7.2，分装于250mL三角瓶中，装液量为80mL，121℃高压蒸汽灭菌20min；

2）娄彻氏链霉菌株的活化：将菌株按无菌操作要求划线接种于高氏一号培养基中，28℃恒温培养5‐7d；

3)娄彻氏链霉菌菌株的液体培养：挑取步骤2）中活化的菌株，接种于所述的发酵培养基中，28℃、180r/min振荡培养72h，得到发酵种子液。将所述种子液按10%的接种量接种到所述的发酵培养基中，28℃、180r/min，继续振荡培养72h，获得浓度为10⁶cfu/mL的娄彻氏链霉菌菌株细胞培养液；

4）娄彻氏链霉菌生防制剂的制备：将步骤2）中活化的菌株打取直径6mm的菌饼；将步骤3）中制备的细胞培养液，在4℃条件下，12000r/min离心10min，收集上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，上清液即为无菌发酵滤液；沉淀用无菌水重新悬浮，得到10⁶cfu/mL的菌悬液；

5）步骤4）中所述的菌饼、发酵滤液和菌悬液均为生防制剂。