[发明专利]利用带鱼制备二肽基肽酶IV抑制肽的方法

权利要求书

1.一种利用带鱼制备二肽基肽酶IV抑制肽的方法，其特征在于：步骤包括：

（1）将带鱼去头、尾和内脏，洗净称重，加入1～3倍带鱼质量的水，绞碎成均匀的鱼肉浆；

（2）将步骤（1）制备的鱼肉浆放入酶解罐中，添加带鱼质量0.1%～1.0%的内切蛋白酶，调温至40～70℃，调pH至5.0～8.5，搅拌水解4～12h，得水解液；

（3）搅拌水解结束后，升温至95～100℃，保持10～15分钟灭酶；

（4）将步骤（3）灭酶后的水解液冷却至40～60℃，添加带鱼质量0.1%～1.0%的外切蛋白酶，调pH至5.0～7.5，搅拌水解2～8h；

（5）搅拌水解结束后，升温至95～100℃，保持10～15分钟灭酶；

（6）将步骤（5）所得灭酶后的水解液离心：3600～4000rpm、1～5℃、10～15分钟，取上清液；

（7）将步骤（6）的上清液加入到超滤膜分离器中，调节超滤膜的压力为0.05～0.1MPa，超滤膜的截留分子量为3000Da，收集超滤膜透过液；

（8）采用亲和层析方法分离纯化DPP-IV抑制肽：将二肽基肽酶IV固定化在CNBr-activated Sepharose4Fast Flow层析介质上；层析介质装柱后将层析柱用缓冲液平衡2～6柱体积，然后将步骤（7）收集的滤膜透过液即超滤液上柱，采用缓冲液清洗2～5柱体积，然后用洗脱液进行洗脱，收集洗脱峰，并透析过夜；

（9）将透析后的溶液在-20～-24℃预冻16～24h，然后在-60～-65℃、0.005～0.0054毫巴冷冻干燥25～36h，即得到二肽基肽酶IV抑制肽。

2.根据权利要求1所述的利用带鱼制备二肽基肽酶IV抑制肽的方法，其特征在于：步骤（2）所述的内切蛋白酶为木瓜蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶中的一种。

3.根据权利要求1所述的利用带鱼制备二肽基肽酶IV抑制肽的方法，其特征在于：步骤（4）所述的外切蛋白酶为Flavourzyme风味蛋白酶。

4.据权利要求1所述的利用带鱼制备二肽基肽酶IV抑制肽的方法，其特征在于：步骤（8）所述缓冲液为20mmol/LPBS+0.15mol/LNaCl,pH7.0的缓冲液。

5.据权利要求1所述的利用带鱼制备二肽基肽酶IV抑制肽的方法，其特征在于：步骤（8）所述洗脱液为20mmol/LPBS+1.0mol/LNaCl,pH7.0的洗脱液。