[发明专利]利用花生粕制备强抗氧化肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及花生粕的深加工技术，具体涉及一种利用花生粕制备强抗氧化肽的方法。

背景技术

中国是世界上重要的花生生产国之一，产量和出口量均占世界第一，其中有50-60%左右的花生用作榨油，每年产生的花生粕就高达400万吨。花生粕中含有40-50%的蛋白质，其氨基酸组成比较合理，接近联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）的推荐值。但由于目前我国花生榨油主要是采用机械压榨和有机溶剂浸出法相结合，提油后得到的花生粕由于蛋白质高度变性，营养功能性降低和风味劣变而限制其应用领域，大多用作饲料、肥料或燃料，产品附加值低，资源浪费严重。

肽是介于氨基酸与蛋白质之间的分子聚合物，然而其功能与蛋白质和氨基酸相距甚远，不仅具有更佳的吸收机制，同时也具有蛋白质或其组成氨基酸所没有的生理功能。如今，对生物活性肽的研究尤其是短肽的研究，已经成为肽类保健食谱和药物的热点。在众多的生物活性肽中，抗氧化肽作为一种天然抗氧化剂，具有较好的抗氧化性和安全性，吸引了越来越多的关注。

花生粕富含蛋白质，是一种制备抗氧化肽的优质蛋白原料。但由于榨油工艺导致花生粕蛋白发生的高度变性以及纤维素含量极高，增加了其制备抗氧化肽的工艺难度。但经过科研工作者的不懈努力，近年来在利用花生粕制备抗氧化肽取得了一定的进展。

张友维采用微生物发酵法对花生粕中的蛋白进行生物降解制备生物活性肽，制得的抗氧化肽在肽含量为4.92mg/ml时，DPPH自由基清除力为54.58%，超氧阴离子自由基清除力为25.12%，还原力为30.8%，且发酵产物水解度达到21.41%。

申请号为201110356467.6，名称为“一种利用花生粕厌氧发酵生产饲用花生肽的方法”的中国专利申请公开了利用乳杆菌、酿酒酵母和枯草杆菌对花生粕进行固态发酵，制备饲用花生肽，一方面降解花生粕中的黄曲霉毒素，另一方面获得较多的活性肽，提高饲料的消化率。但由于发酵工艺繁琐，且过程中容易引发安全隐患，难以实现大规模生产。

利用生物酶制剂降解蛋白质制备生物活性肽不仅安全性较高、条件温和，且水解过程容易控制。因此近年来普遍采用酶解方法制备生物活性肽。

如毛晓宇等人用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、Alcalase蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶对花生粕进行酶解，并筛选出可获得不同生物活性花生肽的最佳酶制剂。

王建化通过对比Alcalase和Neutrase蛋白酶的花生粕酶解特性，发现Alcalase具有更好的酶解效果，制得的花生肽具有明显的抗氧化活性，5%的花生抗氧化活性肽抗氧化效果与3%的VE抗氧化效果相当。

采用酶解法虽可大规模制备抗氧化肽，但由于花生粕蛋白发生了高度变性，蛋白内部二硫键增加，疏水值升高，同时纤维素含量较高，限制其水解效率，蛋白回收率低下，增加了花生抗氧化肽的生产成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用花生粕制备强抗氧化肽的方法。为了克服现有的酶解花生粕制备抗氧化肽的方法中的难题，如由于蛋白内部二硫键增加、疏水值升高而导致水解效率低的问题，本发明采用微波加热和有机酸对花生粕进行预处理，促使花生粕蛋白内部的二硫键转化为巯基键，暴露更多的酶解位点，有利于酶解的进行。同时，采用表面活性剂协同酶解，进一步提高酶解效率。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种利用花生粕制备强抗氧化肽的方法，包括以下步骤：

（1）原料的预处理：按重量取1份花生粕和1-2份酸性缓冲液混匀，通过微波加热，并过打粉机得到粉状花生粕；

（2）花生粕的表面活性剂辅助酶解：加入粉状花生粕质量5-8倍的水，添加蛋白酶和纤维素酶，再加入表面活性剂，在45-60℃下水解，当水解度达到5-10%时，灭酶，离心分离，得到的上清液为富含抗氧化肽的花生粕酶解液；以粉状花生粕的质量为计算基准，蛋白酶的加入量占1.0-1.5%，纤维素酶的加入量占0.6-0.8%，表面活性剂的加入量占0.03-0.05%；

（3）膜分离-乙醇联用分离富集抗氧化肽：往花生粕酶解液中加入乙醇溶液，搅拌均匀；通过膜通量10000Da的超滤膜，收集透过液，再通过膜通量1000Da的超滤膜，收集截留液，得到花生肽溶液；喷雾干燥，得强抗氧化肽。

步骤（1）所述的酸性缓冲液为有机酸缓冲液，pH值为4.0-5.0；所述的有机酸是琥珀酸、柠檬酸或苹果酸；

步骤（1）所述的微波加热是在800-2000W下加热60-200s。