[发明专利]一种利拉鲁肽的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药多肽类原料药的化学合成，尤其涉及一种利拉鲁肽的固相和液相杂交合成方法。

背景技术

利拉鲁肽是一种人胰高糖素样肽-1（GLP-1）类似物，用于治疗糖尿病。分子式:C₁₇₂H₂₆₅N₄₃O₅₁，分子量：3751.20，CAS号:204656-20-2。

利拉鲁肽是2010年批准的药物。美国专利US Patent No.6268343,6458924 and 7235627发明了一种DNA重组工艺合成利拉鲁肽前体，即序列1-31，再通过化学合成法链接Pal-Glu(OSu)-OtBu物质得到目标多肽。DNA重组工艺需要使用复杂的设备，并可能在产品中引入病毒，不利于产品的药用目的。中国专利200610110898.3 and 200510107588报道了直接固相合成利拉鲁肽的方法，然而，由于肽链上十六烷基的憎水性，这样工艺产生的杂质是很难除去的。

因此，本领域迫切需要提供一种可行的利拉鲁肽合成方法来生产高纯的产品，以满足医药用途。

发明内容

本发明旨在提供一种新的利拉鲁肽固相合成方法。

在本发明的第一方面，提供了一种利拉鲁肽的合成方法，所述方法包括步骤：

（1）以Fmoc-Gly-固相合成树脂为起始原料，按照固相合成方法重复进行脱保护基、使用缩合剂进行接肽反应的步骤，依次连接带有保护基的保护氨基酸或保护多肽，切肽得到N末端带有保护基的利拉鲁肽前体；

（2）将N末端带有保护基的利拉鲁肽前体和十六烷基-N-羟基琥珀酰亚胺酯、十六烷酸活化酯或十六烷酸酸酐在液相中进行化学合成，再脱除N末端保护基团，得到目标多肽利拉鲁肽。

在另一优选例中,所述目标多肽由利拉鲁肽前体和十六烷基-N-羟基琥珀酰亚胺酯、十六烷酸活化酯或十六烷酸酸酐与缩合试剂原位活化而得，所述缩合试剂选自DCC,DIC,HBTU或TBTU。

在另一优选例中,所述N末端带有的保护基选自2-Cl-苄氧羰基(即称Cl-Z保护基团)、苄氧羰基(即称Z保护基团)或芴甲氧羰基(即称Fmoc保护基团)；

采用钯炭或金属催化剂氢化脱除Cl-Z保护基团和Z保护基团；

采用碱溶液水解脱除Fmoc保护基团。

在另一优选例中，所述碱溶液选自哌啶或DBU。

在另一优选例中,20位氨基酸为Fmoc-Lys(γ-Glu-OtBu)，N末端氨基酸采用Cl-Z-His(Trt)-OH,Z-His(Trt)-OH,Alloc-His(Trt)-OH或Fmoc-His(Trt)-OH活化酯方法缩合，得到保护的三十一肽树脂，同步使用脱保护剂剂进行脱侧链保护基及切肽，获得N末端用Cl-Z、Z、Alloc或Fmoc保护的利拉鲁肽前体。

在另一优选例中，20位氨基酸为Fmoc-Lys(γ-Glu-OtBu)，N末端氨基酸采用Fmoc-His(Trt)-OH活化酯方法缩合而得，N末端Fmoc脱除后，采用Cl-Z-OSu、Z-OSu或Alloc-OSu进行封端反应，从而得到保护的三十一肽树脂，同步进行脱侧链保护基及切肽，获得N末端用Cl-Z、Z或Alloc保护的利拉鲁肽前体；更佳地，20位氨基酸为Fmoc-Lys(Alloc)-OH，Alloc保护基用四苯基磷钯氢化脱除后，与Boc-γ-Glu-OtBu反应，20位氨基酸为Fmoc-Lys(Boc-γ-Glu-OtBu)；最佳地，20位氨基酸为Fmoc-Lys(Dde)-OH，Dde保护基用2%水合肼/DMF脱除后，与Boc-γ-Glu-OtBu反应，20位氨基酸为Fmoc-Lys(Boc-γ-Glu-OtBu)。

在另一优选例中，20位氨基酸为Fmoc-Lys(Boc)-OH，N末端氨基酸采用Cl-Z-His(Trt)-OH、Z-His(Trt)-OH、Alloc-His(Trt)-OH或Fmoc-His(Trt)-OH活化酯方法缩合而得，从而得到保护的三十一肽树脂，同步进行脱侧链保护基及切肽，获得N末端用Cl-Z、Z、Alloc或Fmoc保护的利拉鲁肽前体(Lys20侧链不含γ-Glu基团)。