[发明专利]生产D-乳酸的重组大肠杆菌及其应用有效
| 申请号： | 201310293659.6 | 申请日： | 2013-07-12 |
| 公开（公告）号： | CN104278003B | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 马延和;张学礼;徐洪涛;朱欣娜;刘萍萍;唐金磊 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P7/56;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京永新同创知识产权代理有限公司 11376 | 代理人： | 程大军;栾星明 |
| 地址： | 300308 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乳酸 重组大肠杆菌 大肠杆菌 生产 工程化 发酵 氨水 发酵过程 氢氧化钠 中和剂 突变 应用 | ||
1.一种重组大肠杆菌，其含有如下修饰：pflB基因表达的抑制、和/或pflB基因所编码的蛋白质活性的抑制；和frdABCD基因簇表达的抑制、和/或frdABCD基因簇所编码的蛋白质活性的抑制，
其中所述大肠杆菌还含有突变的ldhA基因，其所编码的多肽在对应于SEQ ID No.:1所示氨基酸序列中的R282的位置上含有用C置换R的修饰，任选地，所述大肠杆菌中所述突变的ldhA基因的表达增强、和/或所述突变的ldhA基因所编码的蛋白质的活性增强。
2.权利要求1的大肠杆菌，其中所述突变的ldhA基因在对应于SEQ ID No.:2所示核苷酸序列中的C844的位置上含有突变。
3.权利要求2的大肠杆菌，其中所述突变是用T置换C。
4.权利要求1-3任一项的大肠杆菌，其中所述突变的ldhA基因位于质粒或染色体中。
5.权利要求4的大肠杆菌，其中所述大肠杆菌以保藏号CGMCC 7871保藏于CGMCC。
6.权利要求4的大肠杆菌，其中所述大肠杆菌中还含有如下修饰：
mgsA基因表达的抑制、和/或mgsA基因所编码的蛋白质活性的抑制。
7.权利要求6的大肠杆菌，其中所述大肠杆菌以保藏号CGMCC 7678保藏于CGMCC。
8.权利要求6的大肠杆菌，其中所述大肠杆菌以保藏号CGMCC 7679保藏于CGMCC。
9.权利要求1的大肠杆菌，其用于生产D-乳酸。
10.生产D-乳酸的方法，所述方法包括：
(1)发酵培养权利要求1-9任一项的大肠杆菌；和
(2)收获产生的D-乳酸；任选地分离或纯化所述D-乳酸。
11.权利要求10的方法，其中在步骤(1)中包括使用中和剂调节pH值，所述中和剂选自氨水和氢氧化钠。
12.权利要求10的方法，其中在步骤(1)中的发酵过程于高温下进行，所述高温是指42-50℃。
13.权利要求1-9任一项的大肠杆菌在生产D-乳酸中的用途。
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