[发明专利]麦芽α淀粉酶变体

说明书

本发明申请是基于申请日为“1999年2月26日”，申请号为“99803315.4”(国际申请号为“PCT/DK99/00088”)，名称为“麦芽α淀粉酶变体”发明的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及麦芽淀粉酶(maltogenic amylase)变体和构建所述变体的方法。

背景技术

麦芽α淀粉酶(葡聚糖1，4-α-麦芽水解酶，E.C.3.2.1.133)能够将直链淀粉和支链淀粉水解成α构型的麦芽糖，还能够水解麦芽三糖和环糊精。

芽孢杆菌的麦芽α淀粉酶(EP120693)以商品名(丹麦Novo Nordisk A/S的产品)有销售，而且由于其降低淀粉退化的能力而被作为抗变质剂广泛地用于烘烤业。与环糊精葡聚糖转移酶(CGT酶)共有几个特征，包括序列同源性(Henrissat B.，Bairoch A.1996)和转糖基作用产物的形成(Christophersen，C.等，1997，Starch，vol.50，No.1，39-45)。

环麦芽糊精葡聚糖转移酶(E.C.2.4.1.19)也称为环糊精葡聚糖转移酶或者环糊精糖基转移酶，本文缩写为CGT酶，经分子内转糖基反应催化淀粉和类似的底物转变成环麦芽糊精，由此形成各种大小的环麦芽糊精(或CD)。

CGT酶广泛地分布于各种不同的细菌源中并可从所述细菌源中得到，所述细菌包括芽孢杆菌、短杆菌、梭菌、棒状杆菌、克雷伯氏菌、微球菌、热厌氧杆菌，在文献中已广泛地描述过热厌氧杆菌。Norman B E，Jorgensen S T;Denpun Kagaku1992 39 99-106和WO89/03421中已描述由热厌氧杆菌属产生的CGT酶，在WO96/33267中公开了氨基酸序列。在Internet(SCOP或PDF网页)可以得到作为pdf文件1CIU的来自热产硫磺热厌氧杆菌和环状芽孢杆菌的CGT酶的序列，来自环状芽孢杆菌的CGT酶的序列可以作为pdf文件1CDG获得。

Tachibana，Y.，发酵和生物工程杂志(Journal of Fermentation andBioengineering)，83(6)，540-548(1997)描述了CGT酶的克隆和表达。Kim，Y.H.生物化学和分子生物学国际(Biochemistry and Molecular Biology International)41(2)，227-234(1997);Sin K-A，生物技术杂志(Journal of Biotechnology)，32(3)，283-288(!994);D Penninga，生物化学(Biochemistry)，34(10)，3368-3376(1995)和WO96/33267中描述了CGT酶的变体。