[发明专利]一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法

权利要求书

1.一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其步骤包括：

（1）、采集生殖托未成熟的野生瓦氏马尾藻成藻并暂养、催熟，获取受精卵，将获取的受精卵在温度为15℃-22℃，光照强度为1000-1500lx，光周期为10L:14D条件下静置培养，获得幼苗；

（2）、将步骤（1）中的20-80日龄的幼苗叶子和100日龄以上的幼苗假根进行切段组织培养，获得再生苗；将再生苗从组织块上分离，离体培养25-35天，诱导再生苗基部再生出假根，形成完整苗；将完整苗在温度为15-20℃、光照强度1000-1500lx，光照周期10L:14D条件下暂养；

（3）、将步骤（2）中的暂养的完整苗的叶子再次进行切段组织培养，对于长有大量再生叶片的组织块继续培养45-70天，诱导再生叶片表皮继续再生出苗；未长有再生叶片的组织块继续培养45-70天，诱导组织块表皮和表层再生出苗；

（4）、将步骤（3）中的再生苗从组织块上分离，离体培养25-35天，诱导再生苗基部再生出假根形成完整苗，用于再次组织培养。

2.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，将生殖托未成熟的野生瓦氏马尾藻成藻，在温度15℃-20℃，光照强度1000-2000lx，光周期10L:14D的条件下暂养；取雌、雄生殖托侧枝，在温度24℃，光照强度2000-3000lx，光周期14L:10D的条件下催熟，获得受精卵。

3.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，将20-80日龄的幼苗叶子横切成1-2mm宽度的组织块，将100日龄以上的幼苗假根切长1-2mm的组织块，然后将组织块在培养温度为20℃-26℃，光照强度2000-3000lx，光周期10L:14D的条件下培养25-35天，每5-8天更换一次培养液，获得再生苗。

4.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，对再生苗诱导培养形成完整苗的诱导条件为，将再生苗置于温度为20℃-28℃，光照强度为1000-1500lx，光周期为10L:14D的培养液中培养25-35天，每5-8天换一次培养液，获得完整苗。

5.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，选取叶片长度为5-10mm的完整苗，将顶端较大的叶片横切成宽度为1-2mm的组织，再沿中肋纵切成两半，将组织块静置培养25-35天。

6.根据权利要求5所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述静置培养的条件为，培养温度为22℃-26℃，光照强度2000-3000lx，光照周期14L:10D，每5-8天更换一次培养液。

7.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，诱导再生叶片表皮继续再生出苗的诱导条件为，温度24℃-26℃，光照强度1000-1500lx，光照周期14L:10D，每7天换一次培养液；诱导组织块表皮和表层再生出苗的诱导条件为，温度24℃-26℃，光照强度1000-1500lx，光照周期10L:14D，每7天更换一次培养液。

8.根据权利要求1所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，诱导条件为温度22℃-24℃，光照强度1000-1500lx，光照周期10L:14D，每5-7天更换一次培养液。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其特征在于：所述培养液为MES培养基与灭菌海水按照体积比为1:0.01-0.03的比例混合而成的混合液；所述培养液中还含有浓度为0.5-1.0mg/L的KI。

10.根据权利要求8所述的瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法，其特征在于：所述MES培养基的组分为，EDTA·2Na、H₃BO₃、MnCl₂·4H₂O、FeCl₃·6H₂O、ZnCl₂、CoCl₂·6H₂O、柠檬酸铁、NaNO₃、甘油磷酸钠、三羟甲基氨基甲烷，各组分的相应浓度为0.3-0.8g/L、0.4-0.6g/L、0.05-0.09g/L、0.01-0.03g/L、0.002-0.007g/L、0.001-0.003g/L、0.01-0.03g/L、1-4g/L、0.2-0.6g/L、2-7g/L，该MES培养基的pH值为7-8。