[发明专利]一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于海藻人工苗种无性繁殖技术领域，特别涉及一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法。

背景技术

瓦氏马尾藻（Sargassum vachellianum Greville）隶属于马尾藻属，呈褐绿色，具有固着器、主枝、侧枝、叶片、气囊等器官，性别为雌雄异株，多年生，6-7月为繁殖盛期，是一种集中分布于我国浙江、福建、广东及香港等地沿海的暖温带性大型褐藻。瓦氏马尾藻本身因富含蛋白质、碳水化合物、无机盐、维生素等而广泛应用到医药、食品、饲料和有机肥料领域。尤其是有机肥料领域，已经颇受人们的关注。瓦氏马尾藻肥相比化肥，有着天然的优势，没有二次污染，而且对于作物和土壤没有任何危害，对植物的生长起着显著的调节和促进作用。

瓦氏马尾藻是海藻场重要的支持物种之一，也是潮间带和潮下带海藻区系的重要组成部分，不仅可以吸收氮、磷等元素改善海域环境条件，而且对维持海域动植物区系物种的丰度具有重要的生态价值。瓦氏马尾藻植株高大，枝叶繁茂，成片漂浮于水面，能修复脆弱的海洋生态环境。近年来，海洋环境恶化，海域海水的富营养化程度比较高，氮、磷元素的含量高，容易引发赤潮等危害，对海洋生物的生长造成了严重影响。而瓦氏马尾藻等藻类植物能净化水体环境，防止海洋环境的破坏，也为多种门类的海洋生物的栖息生活地，为它们提供了避敌、索饵、产卵的理想场所，从而形成生机蓬勃、稳定变化的生态系统。

近几年，海岸带地区的综合开发和人为因素的干扰，造成许多沿海地区瓦氏马尾藻资源的减少和退化，近海生态环境遭到一定程度的破坏。而瓦氏马尾藻的有性繁殖由于受到放卵量和季节的影响，苗种生产量受到严重限制，而且繁育时间长，繁育量小，很难满足海上增殖或人工栽培所需。

发明内容

本发明的目的是提供一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，本育苗方法不受季节、自然生态条件以及放卵量等限制，能稳定、高效、快速地获得大量的再生苗，可用于海上增殖或人工栽培。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法，其步骤包括：

（1）、采集生殖托未成熟的野生瓦氏马尾藻成藻并暂养、催熟，获取受精卵，将获取的受精卵在温度为15℃-22℃，光照强度为1000-1500lx，光周期为10L:14D条件下静置培养，获得幼苗；

（2）、将步骤（1）中的20-80日龄的幼苗叶子和100日龄以上的幼苗假根进行切段组织培养，获得再生苗；将再生苗从组织块上分离，离体培养25-35天，诱导再生苗基部再生出假根，形成完整苗；将完整苗在温度为15-20℃、光照强度1000-1500lx，光照周期10L:14D条件下暂养；

（3）、将步骤（2）中的暂养的完整苗的叶子再次进行切段组织培养，对于长有大量再生叶片的组织块继续培养45-70天，诱导再生叶片表皮继续再生出苗；未长有再生叶片的组织块继续培养45-70天，诱导组织块表皮和表层再生出苗；

（4）、将步骤（3）中的再生苗从组织块上分离，离体培养25-35天，诱导再生苗基部再生出假根形成完整苗，用于再次组织培养。

所述步骤（1）中，将生殖托未成熟的野生瓦氏马尾藻成藻，在温度15℃-20℃，光照强度1000-2000lx，光周期10L:14D的条件下暂养；取雌、雄生殖托侧枝，在温度24℃，光照强度2000-3000lx，光周期14L:10D的条件下催熟，获得受精卵。

所述步骤（2）中，将20-80日龄的幼苗叶子横切成1-2mm宽度的组织块，将100日龄以上的幼苗假根切长1-2mm的组织块，然后将组织块在培养温度为20℃-26℃，光照强度2000-3000lx，光周期10L:14D的条件下培养25-35天，每5-8天更换一次培养液，获得再生苗。

所述步骤（2）中，对再生苗诱导培养形成完整苗的诱导条件为，将再生苗置于温度为20℃-28℃，光照强度为1000-1500lx，光周期为10L:14D的培养液中培养25-35天，每5-8天换一次培养液，获得完整苗。

所述步骤（3）中，选取叶片长度为5-10mm的完整苗，将顶端较大的叶片横切成宽度为1-2mm的组织，再沿中肋纵切成两半，将组织块静置培养25-35天。所述静置培养的条件为，培养温度为22℃-26℃，光照强度2000-3000lx，光照周期14L:10D，每5-8天更换一次培养液。