[发明专利]一种鉴定子鼠基因型的PCR方法有效
申请号: | 201310296488.2 | 申请日: | 2013-07-15 |
公开(公告)号: | CN103436603A | 公开(公告)日: | 2013-12-11 |
发明(设计)人: | 周宇荀;管清华;肖君华;李凯 | 申请(专利权)人: | 东华大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人: | 黄志达 |
地址: | 201620 上海市*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴定 基因型 pcr 方法 | ||
1.一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,包括:
(1)通过Blast两种品系小鼠的线粒体序列,找到4个SNP位点,选取其中一个位点以子代小鼠线粒体DNA为模板进行PCR扩增;其中,PCR引物为:
上游引物:5’-CATTCTTCATGGCTACTGGATTC-3’;
下游引物:5’-TGCTCATGGTAGTGGAAGTAGAA-3’;
(2)PCR结束后对PCR产物凝胶电泳检测,若出现阳性条带,则进行LDR反应;其中,LDR反应中,每一个SNP位点设计三条探针,一条为位点通用探针,另外两条位点特异性探针分别为:
mtDNA_G:TTGGAGACGTATAGGAAAAGTCAGAC;
mtDNA_A:TTTTGGAGACGTATAGGAAAAGTCAGAT;
(3)LDR结束后,对LDR产物进行凝胶电泳检测,电泳结束后,利用软件提取泳道数据,即可。
2.根据权利要求1所述的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,其特征在于:所述步骤(1)中的两种品系小鼠分别为B6C3HF1和C3HB6F1。
3.根据权利要求1所述的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,其特征在于:所述步骤(1)中作为模板的SNP位点为G9349A。
4.根据权利要求1所述的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,其特征在于:所述步骤(1)中的PCR扩增反应条件为:95℃15min,94℃30s,55℃1min,72℃1min,72℃10min,共35个循环。
5.根据权利要求1所述的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,其特征在于:所述步骤(2)中的凝胶电泳检测为2%琼脂糖凝胶电泳检测。
6.根据权利要求1所述的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,其特征在于:所述步骤(2)中的LDR反应体系为:ddH2O5.95μL,10×LDR Buffer1μL,探针总体积1μL,Taq DNA连接酶0.05μL,PCR产物2μL,总体积10μL。
7.根据权利要求1所述的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,其特征在于:所述步骤(2)中的LDR反应条件为:94℃2min,94℃30s,50℃2min,共35个循环。
8.根据权利要求1所述的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,其特征在于:所述步骤(3)中的凝胶电泳检测为变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
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