[发明专利]一种鉴定子鼠基因型的PCR方法有效

专利信息
申请号: 201310296488.2 申请日: 2013-07-15
公开(公告)号: CN103436603A 公开(公告)日: 2013-12-11
发明(设计)人: 周宇荀;管清华;肖君华;李凯 申请(专利权)人: 东华大学
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 上海泰能知识产权代理事务所 31233 代理人: 黄志达
地址: 201620 上海市*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 鉴定 基因型 pcr 方法
【说明书】:

技术领域

发明属于小鼠遗传学领域,特别涉及一种鉴定子鼠基因型的PCR方法。

背景技术

性发育是指个体性成熟并获得生殖能力的过程。下丘脑-垂体-性腺轴系统的重新激活对哺乳动物性发育的启动起着决定性的作用。该性状是一个复杂性状,在个体水平上受多种遗传因素和环境因素的影响。性发育的启动除了受个体本身的基因型影响外,还受到母体效应的影响。母体效应主要包含两方面的因素,胚胎发育的子宫环境以及由于父本及母本来源的不同所产生的基因印迹的影响。

流行病学调查发现,母亲的身高能直接影响胎儿的大小,同母异父的同胞出生体重的相似性小于同父异母的同胞的出生体重(Gluckman PD,Hanson MA(2004),Maternal constraint of fetal growth and its consequences.,Semin Fetal Neonatal Med9:419–425);另外,试管婴儿的出生体重只与受体母亲的体重有关而与供卵母亲的体重无关(Brooks AA,Johnson MR,Steer PJ,Pawson ME,Abdalla HI(1995),Birth weight:nature or nurture?Early Hum Dev42:29–35)。大鼠实验显示,在妊娠过程中给予母鼠低蛋白饮食,会导致雌性后代阴门开启时间延迟;而以6-不饱和脂肪酸喂饲妊娠期雌鼠,其雌性后代的阴门开启时间提前;而给妊娠期雌鼠注射雌激素,会导致其雌性后代的性发育时间提前并增加患乳腺癌的风险(Hilakivi-Clarke L,Clarke R,Onojafe I,Raygada M,CHO E,Lippman M,(1997)A maternal diet high in n26polyunsaturated fats alters mammary gland development,puberty onset,and breast cancer risk among female rat offspring Proc.Natl.Acad.Sci.USA.94:9372–9377)。

早期胚胎中基因的表达还受到基因印迹的调控,基因印记对个体出生前后的发育,行为和疾病都发挥作用。有研究表明,小鼠的父源性印迹基因Pge1表现出很强的方向性和亲源效应,父系为Pge1(中胚层特异性转录的)突变的小鼠表现出发育迟缓,而且雌性多为不育,而这种表型与其本身的基因型无关(Lefebvre,L.,S.Viville,S.C.Barton,F.Ishino,E.B.Keverne et al.,(1998),Abnormal maternal behaviour and growth retardation associated with loss of the imprinted gene Mest.Nat.Genet.20:163–169)。与此相似的是小鼠父源性基因3的突变会影响子代的胚胎发育和出生后的生长(Curley,J.P.,S.Barton,A.Surani and E.B.Keverne,(2004),Coadaptation in mother and infant regulated by a paternally expressed imprinted gene.Proc.R.Soc.Lond.Ser.B271:1303–1309)。

目前,研究性发育调控的母体因素多从营养学角度来进行,一般采用对孕期母本的营养摄入改变或激素药物暴露来研究胚胎发育环境对子代出生后性状的影响,没有涉及母本基因背景的影响研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,该方法通过鉴定子代小鼠母本,比较子代表型差异,将母体效应和基因类型联系起来,补充了以往研究中通过改变孕鼠的营养状况或药物激素暴露等方式,从环境因素揭示母体效应的不足,扩展了人们对母体效应的遗传学机制的认识。

本发明的一种鉴定子鼠基因型的PCR方法,包括:

(1)通过Blast两种品系小鼠的线粒体序列,找到4个SNP位点,选取其中一个位点以子代小鼠线粒体DNA为模板进行PCR扩增;其中,PCR引物为:

上游引物:5’-CATTCTTCATGGCTACTGGATTC-3’;

下游引物:5’-TGCTCATGGTAGTGGAAGTAGAA-3’;

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