[发明专利]一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种郁金香组织培养的方法，具体涉及一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法。

背景介绍

郁金香原产地中海南北沿岸及中亚细亚和伊朗、土耳其、东至中国的东北地区等地，其为百合科郁金香球根花卉。目前全世界约有2000多种郁金香品种，被大量生产的大约只有150种左右。由于郁金香的花色优美、高雅脱俗、清新隽永，令人百看而不厌，深受人们的厚爱，被视为园林观赏花卉的首选。传统苗圃工艺常采用分球繁殖法进行繁殖，但通过此种方法获得郁金香幼苗周期较长，同时由于郁金香球茎在生长过程中易被病毒、害虫侵食，培育得到的郁金香幼苗大多受到病毒、病害等因素的干扰，导致其品质不断退化，甚至死亡等现象，如何培育出品质不会退化、不受病毒侵害的郁金香育苗变得尤为重要，目前人们利用组织培养技术虽然能够获得郁金香脱毒幼苗，但周期相对较长，并且实验成功率较低。因此需要寻求一种高效高郁金香脱毒幼苗的培育方法。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明的提供了一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，可很好的免受病毒、病害因素的干扰，且培养周期短，成功率高。

为解决上述现有技术存在的问题，本发明采取的技术方案为：一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，其特征在于，包括种球预处理和消毒灭菌、鳞片接种、脱分化培养、再分化形成脱毒幼苗以及幼苗的驯化及移栽，其中，所述种球预处理和消毒包括将选用的种球置于4℃下低温保存30天；所述脱分化过程采用蓝光照射；所述脱分化培养中所用的培养基，其中生长素类物质和细胞分裂素类物质浓度比为1:1；所述再分化过程中，愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml。

所述的一种由郁金香鳞片获得脱毒幼苗的方法，具体步骤如下：

1）种球预处理和消毒灭菌

选用外表无损伤的种球，用保鲜膜包裹郁金香种球，置于4℃中预冷处理30天，将经过低温保存的种球自然升温至室温，剥去种球外层表皮，用无菌解剖刀切去黄化老死的部分，然后用洗洁精洗净表面污物，自来水冲洗20分钟，充分洗净残留的洗洁精，然后首先经过重量比为0.1%的升汞中消毒10分钟，再浸泡在体积比为75%的酒精中灭菌13秒，取出后用无菌水反复冲洗3次，每次4分钟；

2）鳞片接种

用无菌解剖刀切除种球尖端开口部分，再纵切种球，取内层鳞片为材料，用灼烧灭菌后的刀片将鳞片切割成按大小均为1mm2的小块，按凸面向上进行接种，将小碎片移入到灭菌后的培养基中； 

3）脱分化培养

将接有小鳞片的培养基繁殖在人工气候箱中进行脱分化培养，具体培养条件：温度设定为27℃，相对湿度设定为80%，采用蓝光进行照射，光照强度设置为300lux，光照12h/d，处理8-12天后，形成愈伤组织；

4）再分化形成脱毒幼苗

将步骤3）脱分化培育出的愈伤组织转移到再分化培养基中培养，再分化培养在人工气候箱中进行，具体培养条件：温度设定为25℃，相对湿度设定为80%，光照强度设置为1700lux，光照12h/d；在再分化培养基中培养2周后，待愈伤组织开始形成嫩芽后，向再分化培养基表面加入1.5mg/L吲哚丁酸或2,4,5-T 1-2ml，继续在相同的条件下继续培养直至形成胚状体、幼苗。

5）幼苗的驯化及移栽

待郁金香幼苗形成后，将幼苗移栽在灭菌处理后的营养土中，从生态气候箱中移到无菌光照培养架上，再逐渐移到实验外环境中，待其能正常生长后，移栽到土壤中正常培养。