[发明专利]核糖体蛋白类似物RPL22L1的反义核苷酸序列在制备抑制卵巢癌细胞生长药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及核糖体蛋白类似物RPL22L1的反义核苷酸序列的新用途，具体的，本发明涉及一种核糖体蛋白类似物RPL22L1的反义核苷酸序列在制备抑制卵巢癌细胞生长药物中的应用，属于肿瘤生物治疗技术领域。 

背景技术

RPL22L1（ribosomal protein L22-like1），与核糖体蛋白RPL22具有高度同源结构，核糖体是细胞内合成蛋白质的重要细胞器，主要有4条核糖体RNA和80多种核糖体蛋白质构成。在核糖体的翻译过程中，核糖体蛋白可促进rRNA折叠，“微调”核糖体空间构象，在核糖体的结合位点上协调核糖体和mRNA之间的相互作用，与rRNA协同作用催化蛋白质合成。除了参与蛋白质合成，许多核糖体蛋白还具有独立于核糖体之外的许多功能，包括参与DNA复制、转录、修复、RNA剪接和修饰，调控细胞生长和增殖，调控凋亡和发育以及细胞转化等等，统称为核糖体外功能。核糖体蛋白异常会导致细胞代谢失常、细胞表面抗原减少、细胞生长停顿或死亡，最终引发各种遗传代谢性疾病或者肿瘤。数十年前已有研究报道，RPS3a过表达能够诱导NIH3T3细胞向恶性转化，并且诱导裸鼠成瘤。还有许多研究发现在结直肠癌、肝癌、卵巢癌等恶性肿瘤中都存在核糖体蛋白基因高表达的现象。同时，也有一些相反的实验研究结果，发现一些核糖体蛋白在肿瘤细胞中表达下降，也有研究认为某些核糖体蛋白在分化不同的同种肿瘤中表达水平也有明显不同。 

双微体是1962年在人类结肠癌中首次发现的染色体外成对存在、着色与染色质相似或较浅、可自由复制的细胞遗传学结构，常含有扩增基因，参与细胞增殖，或为细胞生长提供选择优势。多种肿瘤的演进过程往往伴随着癌基因的扩增和过表达，癌基因拷贝数的增加是导致癌基因激活的重要机制之一。我们的前期工作发现并确认人卵巢癌细胞UACC-1598中有RPL22L1基因的扩增和过表达，提示其表达水平在卵巢癌形成及演进过程中可能起重要作用。 

化疗是传统治疗卵巢癌的方法，既可单独使用，也可作为综合治疗的重要措施， 但因癌症化疗的副作用较大，往往会引起很多毒副反应和合并症、后遗症，从而为广大卵巢癌患者带来了较大伤害。 

针对肿瘤细胞的特点进行特异性治疗可以提高肿瘤治疗的敏感性和特异性，本发明针对在卵巢癌细胞发生发展过程中起重要作用的RPL22L1，有的放矢，用其反义核苷酸序列进行干扰，发现通过抑制RPL22L1的表达能够有效控制卵巢癌细胞的生长，因此提出了核糖体蛋白类似物RPL22L1的反义核苷酸序列在制备抑制卵巢癌细胞生长药物中的应用。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对目前卵巢癌化疗效果欠佳的情况，提供一种能够通过干扰RPL22L1表达，从而抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力，起到抑制卵巢癌细胞生长的作用的药物。 

为了达到以上目的本发明所采用的技术手段为： 

1、检测肿瘤细胞中RPL22L1扩增情况 

选择含有双微体的人卵巢癌细胞系UACC-1598为研究对象。 

（1）常规细胞培养； 

（2）通过PCR和RT-PCR技术从DNA及mRNA水平检测细胞中RPL22L1扩增情况。 

2、构建pSuper-shRNA-RPL22L1基因真核表达载体抑制RPL22L1表达。 

（1）构建并鉴定pSuper-shRNA-RPL22L1及pSuper-RPL22L1–sis对照组表达载体； 

（2）将构建成功的载体转染入UACC-1598细胞中，分别以Real-time PCR及Western Blotting验证RPL22L1mRNA和蛋白水平沉默的效果； 

（3）建立UACC-1598稳定转染pSuper-shRNA-RPL22L1细胞系。 

3、抑制RPL22L1表达对UACC-1598细胞生物学行为的影响。 

（1）绘制细胞生长曲线检测抑制RPL22L1表达后细胞增殖能力的变化； 

（2）流式细胞术检测抑制RPL22L1表达后的细胞周期变化； 

（3）划痕实验检测抑制RPL22L1表达后细胞迁移能力的变化； 

（4）侵袭实验检测抑制RPL22L1表达后细胞侵袭能力的变化。 

在此研究的基础上，本发明提出了核糖体蛋白类似物RPL22L1的反义核苷酸序列在制备抑制卵巢癌细胞生长药物中的应用。