[发明专利]一种稳定的复合辅酶制剂、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种稳定的复合辅酶冻干制剂，其主要组成成分包括：辅酶A(CoA)、辅酶I(NAD)、谷胱甘肽(GSH)、三磷酸腺苷(ATP)、黄素单核苷酸(FMN)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、腺苷蛋氨酸(SAM)、葡萄糖酸钙及盐酸半胱氨酸、甘露醇。

2.如权利要求1所述复合辅酶制剂，用水溶解后，当辅酶A(CoA)浓度为90-120单位/ml时，优选其他组分含量配比为辅酶I(NAD)0.1-0.3mg/ml、谷胱甘肽(GSH)1-5mg/ml、三磷酸腺苷(ATP)1-2.5mg/ml、黄素单核苷酸(FMN)1.8-12μg/ml、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)3-13μg/ml、二磷酸腺苷(ADP)0.1-0.4mg/ml、一磷酸腺苷(AMP)0.2-0.4mg/ml、腺苷蛋氨酸(SAM)1.2-15μg/ml、葡萄糖酸钙1-5mg/ml、盐酸半胱氨酸0.5-1.5mg/ml、甘露醇0.6-5mg/ml。

3.一种如权利要求1、2所述稳定的复合辅酶制剂的制备方法，主要包括以下步骤：

1)取冰冻新鲜酵母菌，加入纯水搅拌混匀；利用温差法进行菌体破壁(高温为90-97℃，冷却温度为20℃以下)；充分破壁后2810-5120G离心，4-10℃，离心20分钟，收取粗提上清液；

2)取与粗提液上清等体积的活性炭装柱，用纯水冲洗平衡柱体；粗提液上清液调pH值至5-5.5上柱，用乙醇氨洗脱，收集液洗脱；

3)将步骤2)洗脱液蒸发浓缩，将浓缩液调至pH值7.0，用2-5倍纯水稀释后上阴离子交换柱，用20mM pH8.0磷酸盐缓冲液洗脱并收集洗脱样品；

4)将步骤3)洗脱样品用截留分子量为5000道尔顿超滤器超滤，以洁净容器接取滤过液；

5)在步骤4)所得滤过液中，加水稀释，稀释后每毫升含有辅酶A(CoA)90-120U、辅酶I(NAD)0.1-0.3mg/ml、谷胱甘肽(GSH)1-5mg/ml、三磷酸腺苷(ATP)1-2.5mg/ml、黄素单核苷酸(FMN)1.8-12μg/ml、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)3-13μg/ml、二磷酸腺苷(ADP)0.1-0.4mg/ml、一磷酸腺苷(AMP)0.2-0.4mg/ml、腺苷蛋氨酸(SAM)1.2-15μg/ml；

6)在步骤5)的稀释液中加入下列物质，并使其终浓度为：葡萄糖酸钙1-5mg/ml、盐酸半胱氨酸0.5-1.5mg/ml、甘露醇0.6-5mg/ml配制成中间品；中间品用分子量5000道尔顿的超滤器超滤，收集滤出液；

7)将步骤6)收集的滤出液经除菌、灌装；

8)灌装结束后，对产品进行常规预冻，达到要求后进行一次干燥、二次干燥，压塞，获得药学性质稳定的冻干制剂产物。

4.如权利要求3所述制备方法，其冻干过程特征及参数如下：

1)预冻时，导液温度设定为-46--50℃，导液达到-46℃以下保持2-4小时后开始降冷阱；冷阱温度低于-45℃时开始抽真空，一次干燥，导液温度设定为-20℃，然后导液温度以4-7℃/小时升温，真空度设定为0.17±0.01mbar，真空度控制范围为≤0.20mbar或≤5.10V；二次干燥，导液温度设定为39-41℃到温后保持5-8小时，真空度设定为0.09±0.02mbar，真空度控制范围为≤0.14mbar或≤4.80V；

2)冻干后压盖，送检获得药学性质稳定的复合辅酶冻干制剂产品。

5.如权利要求1-4所述制剂及其制备方法在制备用于治疗心脑血管病和消化系统疾病的药品的实践中的应用。