[发明专利]检测纤维二糖酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种检测纤维二糖酶抑制剂的方法，该方法包括以下步骤：将一种用于检测纤维二糖酶活性的纳米金探针溶液加入含待测物质的纤维二糖酶溶液中，所述纳米金探针溶液与所述纤维二糖酶溶液的体积比为20∶1，其中每20体积的纳米金探针溶液中含有2～4体积的纳米金探针浓缩液，将检测温度控制在30℃～35℃，检测pH值控制在4.0～4.5，待纳米金探针反应完全后，检测含待测物质的溶液体系中纳米金探针表面等离子体共振吸收峰强度变化，得到吸收峰在620nm处的吸光度与520nm处的吸光度比值A620/A520，设为A₂；同等条件下，将所述纳米金探针溶液加入不含待测物质的纤维二糖酶溶液中，检测不含待测物质的溶液体系中纳米金探针表面等离子体共振吸收峰强度变化，得到吸收峰在620nm处的吸光度与520nm处的吸光度比值A620/A520，设为A₁；比较A₂和A₁的大小，即可判断待测物质是否为纤维二糖酶抑制剂；

当A₂＜A₁时，表明待测物质为纤维二糖酶抑制剂，所述纤维二糖酶抑制剂对纤维二糖酶活性的抑制率计算方程为：

I=1-C2/C1=(1-10A2-A10.3642)×100%]]>

其中，I为纤维二糖酶抑制剂对纤维二糖酶活性的抑制率，C₁为不含纤维二糖酶抑制剂时纤维二糖酶的活性数值，C₂为含纤维二糖酶抑制剂时纤维二糖酶的活性数值；

所述纳米金探针包括纳米金颗粒，所述纳米金颗粒上修饰有纤维二糖和6-巯基己-1-醇。

2.根据权利要求1所述的检测纤维二糖酶抑制剂的方法，其特征在于：所述纳米金探针的粒径为40nm～60nm。

3.根据权利要求1所述的检测纤维二糖酶抑制剂的方法，其特征在于：所述纳米金探针的Zeta电位为-30mV～-40mV。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的检测纤维二糖酶抑制剂的方法，其特征在于，所述纳米金探针主要由以下方法制备得到：在配好的纤维二糖溶液中加入氯金酸溶液和硼氢化钠溶液，充分混匀且反应完全后，将得到的反应产物低速离心纯化以去除沉积颗粒，再于上清液中加入6-巯基己-1-醇进行培养，培养完成后高速离心纯化，将高速离心后的沉淀重溶于超纯水中，得到含有用于检测纤维二糖酶活性的纳米金探针的溶液。

5.根据权利要求4所述的检测纤维二糖酶抑制剂的方法，其特征在于：所述氯金酸、硼氢化钠、纤维二糖的摩尔用量比为1∶（16.3～18.4）∶（1.2～6）。

6.根据权利要求4所述的检测纤维二糖酶抑制剂的方法，其特征在于：所述氯金酸与6-巯基己-1-醇的摩尔用量比为1∶（0.002～0.004）。

7.根据权利要求4所述的检测纤维二糖酶抑制剂的方法：所述加入6-巯基己-1-醇进行培养时的温度控制在30℃～37℃，培养时间为2h～2.5h。

8.根据权利要求4所述的检测纤维二糖酶抑制剂的方法，其特征在于：所述低速离心时的转速为1200rpm～1500rpm，所述高速离心时的转速为12000rpm～15000rp。