[发明专利]一种甘氨酰组氨酰赖氨酸含量的测定方法

权利要求书

1.一种甘氨酰组氨酰赖氨酸含量的测定方法，步骤如下：

（1）取甲基橙标准溶液，分别与不同浓度的GHK标准溶液进行反应，反应后的标准反应液经分光光度计检测吸光度值，以吸光度值为纵坐标、标准反应液中剩余的甲基橙浓度值为横坐标，制作甲基橙溶液标准曲线；

（2）取待测GHK样品称重后，获得待测GHK样品质量，将待测GHK样品配制待测GHK样品溶液，然后将待测GHK样品溶液与甲基橙标准溶液进行反应，反应后的待测反应液经分光光度计检测吸光度值，根据步骤（1）制得的甲基橙溶液标准曲线，获得反应后剩余的甲基橙摩尔浓度，然后根据如下公式计算GHK的摩尔浓度：

反应消耗的甲基橙摩尔浓度=反应前甲基橙标准溶液的摩尔浓度－反应后剩余的甲基橙摩尔浓度

GHK摩尔浓度=反应消耗的甲基橙摩尔浓度÷2

再根据如下公式计算GHK质量：

GHK质量=340.38×GHK摩尔浓度值

最后，根据如下公式计算甘氨酰组氨酰赖氨酸含量：

甘氨酰组氨酰赖氨酸含量=（GHK质量÷待测GHK样品质量）×100%。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤（1）中的具体操作步骤如下：

取同一浓度的甲基橙标准溶液8份，每份各1.0～5.0mL，分别加入磷酸二氢钠-柠檬酸缓冲溶液1.0～5.0mL，再分别加入不同浓度的GHK标准溶液各1.0～5.0mL，充分混合，加热到30℃，恒温反应30min；离心，取上清液，在465nm波长处测定每个标准反应液的吸光度值，以吸光度值为纵坐标、标准反应液中剩余的甲基橙浓度值为横坐标，制作甲基橙溶液标准曲线。

3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述的磷酸二氢钠-柠檬酸缓冲溶液的配制方法如下：

称取磷酸二氢钠溶于去离子水中，摇均，制得浓度为0.2mol/L的磷酸二氢钠溶液；称取一水柠檬酸溶于去离子水中，摇均，制得浓度为0.1mol/L的柠檬酸溶液；将磷酸二氢钠溶液加入到柠檬酸溶液中，柠檬酸溶液与磷酸二氢钠溶液的体积比为1：（1.0～1.8），混合均匀，制得pH5.0～6.0的磷酸二氢钠-柠檬酸缓冲溶液。

4.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述的甲基橙标准溶液的配制方法如下：

称取甲基橙标准品溶于去离子水中，摇匀，制得0.08～0.12mmol/L的甲基橙标准溶液。

5.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤（1）中的GHK标准溶液的配制方法如下：

称取甘氨酰组氨酰赖氨酸标准品溶于去离子水中，制得浓度为0.01～0.05mmol/L的GHK标准溶液。

6.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤（2）中待测反应液的吸光度值的获得，具体步骤如下：

i、取待测GHK样品称重后，获得待测GHK样品质量，将待测GHK样品溶于去离子水中，制得浓度为0.01～0.02mmol/L的待测GHK样品溶液；

ii、取甲基橙标准溶液1.0～5.0mL，加入磷酸二氢钠-柠檬酸缓冲溶液1.0～5.0mL，制得甲基橙标准反应液；

iii、取步骤i的待测GHK样品溶液1.0～5.0mL加入到步骤ii配制的甲基橙标准反应液中，充分混合，加热到30℃，恒温反应30min；离心，取上清液，在465nm波长处测定待测反应液的吸光度值。

7.如权利要求2或6所述的测定方法，其特征在于，离心条件为3500～4500r/min、离心时间为10～20min。