[发明专利]快速获取鹅铁蛋白重链基因编码区序列及定量检测其表达的方法及其引物

权利要求书

1.一种快速获取鹅铁蛋白重链基因编码区序列的方法，其特征在于，根据GenBank上原鸡FTH基因的编码区序列设计并合成特异性引物FTH-L，其序列为：上游引物：5’GTTCCTGCGT CAACAGTGCT TGGAC3’；下游引物：5’TTATTGGATG GAGGGCAGTA CACA3’（如SEQ ID NO:1-2所示）；通过RT-PCR扩增，PCR产物的回收纯化，目的基因的连接和转化，阳性菌落的筛选和测序，获取FTH基因全长编码区序列；PCR反应参数设置：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，30 cycles；72 ℃ 10 min。

2.一种定量检测鹅铁蛋白重链基因表达的方法，其特征在于，根据权利要求1所述方法获取的FTH基因编码序列设计并合成特异性引物FTH-S，其序列为：上游引物：5’CAGGGTGGTG TTCGTGGCA3’；下游引物：5’CTGGATGAGC AGGTGAAGG3’（如SEQ ID NO:3-4所示）；通过RT-PCR扩增，实时荧光定量PCR构建FTH基因荧光定量PCR引物的标准曲线和溶解曲线，然后检测鹅不同部位和不同发育时期的组织样品中FTH表达量；PCR反应参数设置：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40 cycles。

3.一种如权利要求1所述的快速获取鹅FTH基因编码区序列的方法，其特征在于：设计了采用常规RT-PCR方法进行一次克隆即可快速获得FTH基因编码区序列的基因特异性引物，其序列如SEQ ID NO:1-2所示。

4.一种采用权利要求2所述的快速、直观并准确测定鹅FTH基因在不同组织和不同发育时期表达规律的方法及其中所设计的引物，其序列如SEQ ID NO:3-4所示。