[发明专利]一种提高变色栓菌（Trametes versicolor）漆酶产量的方法

权利要求书

1.一种提高变色栓菌（Trametes versicolor）漆酶产量的方法，其特征在于，所述方法包括：在变色栓菌漆酶发酵过程的菌丝体生长阶段，向发酵液中添加法尼醇，并继续发酵以产生漆酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述法尼醇添加的终浓度为10～100μM，优选为30～80μM，更优选为40～60μM。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，以法尼醇溶液的形式向发酵液中添加法尼醇，所述法尼醇溶液的配制溶剂为乙醇、正丙醇、异丙醇和正丁醇中的一种或至少两种的混合，优选为乙醇或异丙醇。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：

（1）将预培养的变色栓菌菌丝体接种到漆酶发酵培养基中，进行发酵培养；

（2）在所述发酵培养过程的菌丝体生长阶段，向发酵液中添加法尼醇溶液；

（3）在菌丝体生长结束并进入漆酶合成阶段后，选择适于漆酶表达和分泌的pH、搅拌速率和通气量，并继续培养以产生漆酶；

（4）培养至发酵液中漆酶活力达到峰值时，结束发酵并收集发酵液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中发酵培养的具体条件：

pH为4.1～6.0，优选为4.5～5.5；

搅拌速率为200～400rpm，优选为250～350rpm；

通气量为0.2～0.5vvm，优选为0.25～0.45vvm，更优选为0.3～0.4vvm。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中：

所述变色栓菌菌丝体接种后的初始生物量为0.5～2g/L，优选为0.8～1.6g/L，更优选为1～1.5g/L；

所述发酵培养过程中菌丝体生长的时间为24～48h，优选为28～44h，更优选为32～40h。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中：

所述向发酵液中添加法尼醇溶液为一次性或分多次添加，优选一次性添加；

所述法尼醇溶液采用0.22μm滤膜过滤除菌；

所述法尼醇溶液的浓度为所述添加的终浓度的200～2000倍，优选为500～1500倍，更优选为800～1200倍。

8.根据权利要求4至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中：

所述法尼醇溶液的添加时间为所述步骤（1）中发酵培养过程的第0～36h，优选为第4～32h，更优选为第12～24h。

9.根据权利要求4至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中：

所述pH为6.1～8.0，优选为6.5～7.5；

所述搅拌速率为80～180rpm，优选为100～150rpm；

所述通气量为0.05～0.15vvm，优选为0.08～0.12vvm。

10.根据权利要求4至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：

（1’）在温度26℃、pH4.1～6.0、搅拌速率200～400rpm和通气量0.2～0.5vvm的条件下，将预培养的变色栓菌菌丝体以0.5～2g/L的初始生物量接种到漆酶发酵培养基中，进行发酵培养；

（2’）在所述发酵培养过程的第0～36h，一次性向发酵液中添加法尼醇溶液至法尼醇的终浓度为10～100μM；

（3’）在菌丝体生长结束并进入漆酶合成阶段后，在pH6.1～8.0、搅拌速率80～180rpm和通气量0.05～0.15vvm的条件下，继续培养以产生漆酶；

（4’）培养至发酵液中漆酶活力达到峰值时，结束发酵并收集发酵液。