[发明专利]从含白蛋白的溶液制备白蛋白的方法和在含白蛋白的溶液中使用辛酸盐使病毒灭活的方法

说明书

技术领域

本发明描述的是在从血浆纯化白蛋白的过程中使用辛酸盐使病毒灭活的方法。 

背景技术

人类血清白蛋白（以下称为白蛋白）是人类血浆中最丰富的蛋白质。体液白蛋白是具有67kDa的分子量的585个氨基酸的蛋白质。该蛋白质具有约20天的血清半衰期并且参与运输很多激素、代谢物、和药物以及维持渗透压和缓冲血液pH。在外伤、烧伤、和外科手术患者中治疗性地给予白蛋白来代替流失的体液并恢复血量。 

通过差别分馏法，Cohn首次描述了从人类血浆中纯化白蛋白。参见Cohn et al.,J.Am.Chem.Soc.68:459-475（1946）；Cohn et al.,J.Am.Chem.Soc.69:1753-1761（1947）；美国专利号2,390,074和2,469,193。由Gerlough改进了这些方法。参见美国专利号2,710,293和2,710,294。方法使用冷乙醇并操纵pH、离子强度、蛋白质浓度、和温度来沉淀血浆蛋白质如白蛋白。 

用于从人类血浆中纯化白蛋白用于医药产品的流程典型地包括病毒灭活步骤以降低传播血源性病毒的风险。这些病毒灭活步骤可以包括：热巴氏杀菌、有机溶剂、或有机溶剂与去垢剂的组合物（例如，磷酸三正丁基酯和聚山梨醇酯80）。另外，脂肪酸辛酸酯、或其钠盐（例如，辛酸钠）， 已经被有效地用作病毒灭活药剂。参见美国专利号4,939,176；国际专利申请公开号WO1998/024485与WO2000/056768；Lundblad and Seng,Vox Sang.60:75-81（1991）;Johnston,Jonstone,&Wu,Biologicals31:213-221（2003）。此外，在纯化治疗性的人类白蛋白中，辛酸盐也被用作稳定剂并且用作分配剂。参见美国专利号5,250,663和5,561,115。 

从Cohn级分（留分）IV-1流出液或级分V中纯化人类白蛋白并且包括丙酮干燥步骤来浓缩白蛋白和灭活病毒。丙酮法昂贵并且使用大量的丙酮，其引起火灾或爆炸危险。因此，需要可替代的病毒灭活和浓缩程序。本文描述了在低pH及升高的温度条件下使用辛酸酯灭活病毒随后通过超滤/渗滤从人类血浆中纯化白蛋白的方法。 

发明内容

本文中所描述的是在从血浆中纯化白蛋白的过程中使用辛酸盐灭活病毒的方法。 

本文中所描述的一个实施方式是从包含白蛋白的溶液中制备白蛋白的方法，包括：调节溶液的蛋白质浓度至低于约5%；调节溶液的pH至约pH5以下；加入辛酸（caprylic acid）（辛酸，octanoic acid）或辛酸钠；提高溶液温度高于约20°C；和温育该溶液。 

在本文中所描述的一些方面中，温育温度是27°C-30°C。 

在本文中所描述的一些方面中，温育持续约30min至约120min。 

在本文中所描述的一些方面中，温育持续至少约90min。 

在本文中所描述的一些方面中，辛酸盐浓度是从约10mM至约40mM。 

在本文中所描述的一些方面中，辛酸盐浓度是约15mM至约30mM。 

在本文中所描述的一些方面中，辛酸盐浓度是约20mM。 

在本文中所描述的一些方面中，pH值是约3.8至约5。 

在本文中所描述的一些方面中，pH值是约5。 

在本文中所描述的一些方面中，该方法进一步包括：过滤溶液；进行超滤及渗滤；配制和批化（批次化，bulking）溶液；和灭菌、灌装和巴氏杀菌白蛋白。 

本文中所描述的另一个实施方式是从包含白蛋白质的溶液中制备白蛋白的方法，包括：调节溶液的蛋白质浓度至低于约5%；调节溶液的pH至约pH5以下；加入辛酸（caprylic acid）（辛酸，octanoic acid）或辛酸钠至约20mM的浓度；提高溶液温度至约27°C–30°C；并且温育该溶液持续至少约30min至约120min。 

在本文中所描述的一些方面中，温育持续至少约90min。 

在本文中所描述的一些方面中，pH值为约5。 

在本文中所描述的一些方面中，方法进一步包括：过滤溶液；进行超滤及渗滤；配制和批化溶液；和灭菌、灌装和巴氏杀菌白蛋白。