[发明专利]一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法

权利要求书

1.一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，包括以下步骤：

⑴制备提取物浸膏：

将藏茵陈药材以1 g：5 mL ~30 mL的比例用体积浓度为5~95%的乙醇或体积浓度为5~100%的甲醇在提取温度为60~95℃、提取次数2~4次、每次1~4 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；所述提取液在压力为0.02~0.07MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏；

⑵萃取：

将所述藏茵陈提取物浸膏用其质量的1~10倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位；

⑶所述正丁醇部位干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末；

⑷制备液相色谱粗分离：

将所述正丁醇部位干燥粉末用其质量的1~10倍的体积浓度为5~100%的甲醇或体积浓度为5~95%的乙醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，用体积浓度为60%~70%甲醇溶液进行洗脱，并采用210 nm~280 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集洗脱液A；该洗脱液A在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥后即得含龙胆苦苷、芒果苷、獐牙菜苷和异荭草苷四种化合物的组分群；

⑸高速逆流色谱分离：

将溶剂系统配置于分液漏斗中，充分振荡后静置分层，取下相为固定相，上相为流动相；将所述固定相泵入高速逆流色谱仪中，启动主机，待达到700~900转/min的转速后，将所述流动相泵入所述高速逆流色谱仪，待平衡后，将所述步骤⑷所得的组分群溶于上相溶液中，过滤，由进样阀进样，根据检测器谱图接收目标成分，得到纯度大于90%的獐牙菜苷和异荭草苷粗品及龙胆苦苷和芒果苷混合物；所述溶剂系统由氯仿、正丁醇、甲醇、水按4：1.5~2.5：2~4：3的体积比混合而成；

⑹凝胶色谱分离纯化：

将所述獐牙菜苷和异荭草苷粗品及龙胆苦苷和芒果苷混合物用其质量的1~10倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，流速为1 mL/min~ 10 mL/min，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度大于98%的獐牙菜苷、异荭草苷、龙胆苦苷和芒果苷化学对照品。

2.如权利要求1所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑴中藏茵陈药材是指川西獐牙菜、抱茎獐牙菜、印度獐牙菜和肋柱花中的一种。

3.如权利要求1所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑶中的干燥是指冷冻干燥、喷雾干燥、烘箱干燥中的一种。

4.如权利要求3所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述冷冻干燥的条件是指冷肼温度为-20~-50℃，真空度为20Pa~50 Pa。

5.如权利要求3所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述喷雾干燥的条件是指入料流量为200~1000 mL/h，入料温度为30~70℃，进风温度为170~210℃，进风量为16~28 m³/h。

6.如权利要求3所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述烘箱干燥的温度为40~70℃。

7.如权利要求1所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑷中的洗脱条件是指洗脱流速为20 mL/min~100 mL/min，洗脱体积为色谱柱体积2~10倍。

8.如权利要求1所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑷中的制备型高效液相柱为市售产品，且其填料为C₈或C₁₈键合相填料，填料粒径为5~20um。

9.如权利要求1所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑸中高速逆流色谱仪的工作条件是指流速为1~3 mL/min，检测波长210 nm~280 nm，温度为20℃~40℃。

10.如权利要求1所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑹凝胶分离柱中的凝胶填料为Sephadex LH-20。