[发明专利]一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学对照品的制备方法，尤其涉及一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法。

背景技术

藏茵陈为藏医用于治疗各种肝炎、胆囊炎及利胆退黄等肝胆系统疾病。目前无法稳定从藏茵陈中获得纯度为98%以上的化学对照品，不能满足藏茵陈新药创制及相关制剂的质量控制要求，制约了藏茵陈药材的药用开发研究。

国内外的学者也对龙胆苦苷、芒果苷、獐牙菜苷、异荭草苷化学成分进行了分离纯化，例如专利CN102503996A对藏茵陈中龙胆苦苷进行分离纯化，但是未得到龙胆苦苷的化学对照品，只是得到了龙胆苦苷的混合物。专利CN102372752A采用大孔树脂、聚酰胺柱分离从秦艽中分离得到龙胆苦苷，学者雷宇佳等也应用制备型液相从川西獐牙菜中分离纯化龙胆苦苷（色谱，2010，09期），专利CN1844133采用树脂脱色等技术从芒果叶或扁桃叶中制备高纯度芒果苷，提取的芒果苷纯度大于90%。袁叶飞等采用溶剂提取法与聚酰胺柱色谱法分离芒果苷（时珍国医国药，2009，20卷），专利CN102285976从竹叶黄酮中提取异荭草苷，赵平等从荭草中采用柱分离得到了异荭草苷对照品（贵阳医学院学报，2008，33期），从上述专利与文献可以看出分离龙胆苦苷、芒果苷、獐牙菜苷、异荭草苷均采用常规的分离技术，而这些技术不仅费时、污染环境，而且对样品有不可逆行的吸附作用，不适合大规模应用。

高速逆流色谱技术是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支撑物的高效、快速的液液分配色谱分离技术。该技术具有分离量大、样品无损耗、回收率高、节约溶剂等优点，已广泛应用于生物、医药、环保等领域。专利CN101070335采用高速逆流从龙胆中分离龙胆苦苷，专利CN102617669A采用大孔树脂与高速逆流技术从芒果皮中分离纯度芒果苷。但利用制备液相色谱、高速逆流色谱和凝胶色谱从藏茵陈药材中同时分离制备获得纯度在98%以上龙胆苦苷、芒果苷、獐牙菜苷和异荭草苷化学对照品的专利及文献尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种分离时间短、有机溶剂消耗少且稳定性和重复性好的从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法。

为解决上述问题，本发明所述的一种从藏茵陈中分离制备四种苷类化学对照品的方法，包括以下步骤：

⑴制备提取物浸膏：

将藏茵陈药材以1 g：5 mL ~30 mL的比例用体积浓度为5~95%的乙醇或体积浓度为5~100%的甲醇在提取温度为60~95℃、提取次数2~4次、每次1~4 h的条件下进行加热回流提取，合并提取液；所述提取液在压力为0.02~0.07MPa条件下经减压浓缩后得到藏茵陈提取物浸膏；

⑵萃取：

将所述藏茵陈提取物浸膏用其质量的1~10倍去离子水溶解后，依次用氯仿、正丁醇进行萃取，分别得到氯仿部位、正丁醇部位和水部位；

⑶所述正丁醇部位干燥至恒重后，得到正丁醇部位干燥粉末；

⑷制备液相色谱粗分离：

将所述正丁醇部位干燥粉末用其质量的1~10倍的体积浓度为5~100%的甲醇或体积浓度为5~95%的乙醇溶解，然后注入到制备型高效液相色谱中，用体积浓度为60%~70%甲醇溶液进行洗脱，并采用210 nm~280 nm的检测波长进行在线紫外检测，收集洗脱液A；该洗脱液A在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥后即得含龙胆苦苷、芒果苷、獐牙菜苷和异荭草苷四种化合物的组分群；

⑸高速逆流色谱分离：

将溶剂系统配置于分液漏斗中，充分振荡后静置分层，取下相为固定相，上相为流动相；将所述固定相泵入高速逆流色谱仪中，启动主机，待达到700~900转/min的转速后，将所述流动相泵入所述高速逆流色谱仪，待平衡后，将所述步骤⑷所得的组分群溶于上相溶液中，过滤，由进样阀进样，根据检测器谱图接收目标成分，得到纯度大于90%的獐牙菜苷和异荭草苷粗品及龙胆苦苷和芒果苷混合物；所述溶剂系统由氯仿、正丁醇、甲醇、水按4：1.5~2.5：2~4：3的体积比混合而成；

⑹凝胶色谱分离纯化：

将所述獐牙菜苷和异荭草苷粗品及龙胆苦苷和芒果苷混合物用其质量的1~10倍的体积浓度为100%的甲醇溶解后，上样到凝胶分离柱中，并采用体积浓度为100%的甲醇溶液进行洗脱，流速为1 mL/min~ 10 mL/min，得到洗脱液B；该洗脱液B在压力为0.02~0.07MPa条件下经浓缩干燥至恒重后得到纯度大于98%的獐牙菜苷、异荭草苷、龙胆苦苷和芒果苷化学对照品。