[发明专利]使用免疫球蛋白片段的促胰岛素缀合物

说明书

本申请是于2008年1月4日提交的申请号为2008800017664，发明名称为“使用免疫球蛋白片段的促胰岛素缀合物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种用于促胰岛素肽的长效配方的促胰岛素肽缀合物。具体地，本发明涉及一种显著提高体内功效持续时间的改良的促胰岛素肽的缀合物，该肽缀合物是通过将促胰岛素肽和非肽聚合物以及免疫球蛋白Fc共价连接产生的，以及本发明还涉及该肽缀合物的制备方法。

背景技术

肽由于它们的低稳定性而容易变性，由体内的蛋白水解酶降解，从而失去活性，并且肽具有相对较小，从而容易通过肾。因此，为了保持血液浓度和包括作为药物有效成分的肽的药物浓度，必须给病人频繁地服用肽类药物来保持所需要的血液浓度和药物浓度。然而，该肽类药物通常以注射剂的形式给药，而这样频繁的给药使得病人很痛苦。为解决这些问题，已经进行了许多努力。作为其中的一种努力，已经尝试通过生物膜增加肽类药物的传送以通过口咽或鼻咽吸入来运送肽类药物。然而，与注射相比，由于体内的传送效率低，这种方法仍然很难保持该肽类药物的体内活性。

另一方面，已经进行了很多努力来改善肽类药物的血液稳定性，并将药物在血液中以高浓度保持长时间，从而使该药物的药效最大化。因此，这种肽类药物的长效制剂需要增加肽类药物的稳定性，并保持不会引起病人免疫反应的足够高浓度的药物浓度。

作为稳定肽并抑制它通过蛋白水解酶降解的方法，已经进行了一些实验来修饰对该蛋白水解酶敏感的特定氨基酸序列。例如，由于GLP-1(7-37或7-36酰胺)通过二肽基肽酶IV（DPP IV）在第8氨基酸（Ala）和第9氨基酸（Asp）之间进行剪切而损失了GLP-1的药物浓度，因此具有减少血液中葡萄糖浓度以治疗2型糖尿病作用的GLP-I(7-37或7-36酰胺)具有4分钟或更短的生理活性的半衰期（Kreymann等，1987）。因此，已经进行了各种关于具有抗DPP IV的GLP-I类似物的研究，并且已经进行了用Gly取代Ala（Deacon等，1998；Burcelin等，1999）或用Leu或D-Ala取代Ala（(Xiao等，2001)）的实验，从而在保持它的活性的同时增加了对DPP IV的抗性。GLP-1的N末端氨基酸，His⁷对GLP-1的活性是重要的，并且作为DPP IV的目标。因此，美国专利第5，545，618号描述了用烷基或酰基修饰N末端，并且Gallwitz等描述了第7位His进行N甲基化或а甲基化，或者整个His用咪唑取代来增加对DPP IV的抗性并保持生理活性。

除了这些修饰，从希拉毒蜥蜴的唾液腺纯化的GLP-1类似物exendin-4（美国专利第5，424，686号）具有对DPP IV的抗性并比GLP-I具有更高的生理活性。因此，它具有比GLP-1的半衰期更长的2至4小时的体内半衰期。然而，仅使用增加DPP IV抗性的方法，生理活性不能被充分地保持，并且在使用商业可获得的exendin-4（exenatide）的情况下，它需要一天两次被注射给病人，这对病人仍然是很痛苦的。

这些促胰岛素肽具有一个问题，通常肽的大小很小。从而，它们不能在肾中被重新获得，并且它们随后被排出体外。因此，已经使用以化学方法在肽的表面添加例如聚乙二醇（PEG）的具有高溶解度的聚合物来抑制在肾中的损失的方法。

PEG非特异性地结合到特异位点或目标肽的多个位点产生了增加肽的分子量的效果，并从而抑制通过肾的损失，并防止水解，而不产生任何的副作用。例如，国际专利公开第WO2006/076471号申请描述了PEG结合到B型利钠肽或BNP,BNP结合到NPR-A激活cGMP的产生，cGMP使得动脉血压降低，并因此作为充血性心力衰竭的治疗剂，从而保持生理活性。美国专利第6，924，64号描述了PEG结合到exendin-4的赖氨酸残基来增加它的体内停留时间。然而，这种方法增加了PEG的分子量，从而增加了肽类药物的体内停留时间，同时随着分子量的增加，该肽类药物的浓度显著地减少了，并且肽的反应性也降低了。因此，产量被不希望的降低了。