[发明专利]一种产生神经源性肌肉萎缩小鼠模型的受精卵的方法有效
| 申请号： | 201310311292.6 | 申请日： | 2013-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN103409463A | 公开（公告）日： | 2013-11-27 |
| 发明（设计）人： | 彭亚会;惠洋;郑天虎;周凌云;李冀宏;李思佳;贺荣章;贾熙卓;王大勇;李丹 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 孙皓晨;费碧华 |
| 地址： | 150086 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 产生 神经 肌肉 萎缩 小鼠 模型 受精卵 方法 | ||
1.编码ALAS-E的核苷酸序列在构建产生神经源性肌肉萎缩小鼠模型的受精卵中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述编码ALAS-E的核苷酸序列的GeneBank登录号为NM_009653.3。
3.含有编码ALAS-E的核苷酸序列的线性转基因序列在构建产生神经源性肌肉萎缩小鼠模型的受精卵中的应用，所述的线性转基因序列从5’端至3’端依次含有chickenβ-actin启动子，CMV增强子，ALAS-E cDNA序列以及终止信号rabbit β-globin poly(A)序列。
4.一种产生神经源性肌肉萎缩小鼠模型的受精卵的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）构建一个线性转基因序列，该序列从5’端至3’端依次含有chickenβ-actin启动子，CMV增强子，ALAS-E cDNA序列，终止信号rabbitβ-globin poly(A)序列；
（2）应用显微注射的方法将构建的基因序列注入到小鼠的成活的受精卵中。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述的线性的转基因序列是通过以下方法构建得到的：以提取得到的小鼠RNA为模板进行反转录，获得cDNA模板序列，设计引物，以获得的cDNA为模板扩增编码ALAS-E的cDNA序列，克隆入pCAGG载体，得到含有ALAS-E cDNA序列的pCAGG重组载体，ALAS-E基因的表达由chickenβ-actin启动子和CMV增强子启动,ALAS-E连接rabbitβ-globin poly(A)终止信号；pCAGG重组载体经SalI以及DraI酶切，获得线性转基因序列，纯化回收用于显微注射，所述的线性转基因序列从5’端至3’端依次含有chicken β-actin启动子，CMV增强子，ALAS-E cDNA序列以及终止信号rabbitβ-globin poly(A)序列。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的pCAGG重组载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
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