[发明专利]一种双功能抗体、其构建方法及双功能抗体基因工程药物

权利要求书

1.一种双功能抗体的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A：分别获取抗体的重链恒定区基因、抗体的轻链恒定区基因、第一目的基因和第二目的基因；

B：采用表达载体构建包括所述抗体的重链恒定区基因、所述抗体的轻链恒定区基因、所述第一目的基因和所述第二目的基因的重组载体穿梭质粒；

C：将步骤B中形成的重组载体穿梭质粒转染至表达细胞株中进行培养，表达得到所述双功能抗体。

2.根据权利要求1所述的双功能抗体的构建方法，其特征在于，在所述步骤A中，根据目标抗原决定簇获取所述第一目的基因和所述第二目的基因。

3.根据权利要求1或2所述的双功能抗体的构建方法，其特征在于，所述步骤A包括：

设计所述抗体的重链恒定区基因的引物、所述抗体的轻链恒定区基因的引物、所述第一目的基因的引物和所述第二目的基因的引物；

引物1：5’-CCC AAG CTT CCA AAA CGA CAC CCC CAT CTG-3’；

引物2：5’-AAA AGG GAC TCC CCG GTT CAT CTA GGG CGC TTG CCCAAT CAT-3’；

引物3：5’-GTC GCG GCC GC ACT GTG GCT GCA CCA TCT GTC-3’；

引物4：5’-GAA GAG AAA TAA ATA AAC AAT CAT ACA CTC TCC CCTTTT GAA GCT-3’；

引物5：5’-ATG ATT GGG CAA GCG CCC TAG ATG AAC CGG GGAGTC CCT TTT-3’；

引物6：5’-AGA GGA TCC CCA GGT GCC ACT ATC CTG GAG-3’；

引物7：5’-TTC AAA AGG GGA GAG TGT ATG ATT GTT TAT TTT CTCTTC-3’；

引物8：5’-GAA GGTACC CAA GCC CAC AGA TAT TTCCTG-3’；

基于PCR方法，使用引物1和引物2扩增出所述抗体的重链恒定区基因，使用引物3和引物4扩增出所述抗体的轻链恒定区基因，使用引物5和引物6扩增出所述第一目的基因，以及使用引物7和引物8扩增出所述第二目的基因。

4.根据权利要求1所述的双功能抗体的构建方法，其特征在于，在步骤B中，所述表达载体是pCDNA3.1/His C、pCDNA5/FRT/TO TOPO TA、pEGFP-N1或pBudce4.1。

5.根据权利要求1所述的双功能抗体的构建方法，其特征在于，在步骤C中，所述表达细胞株为293细胞、AD293细胞或中国仓鼠卵巢细胞。

6.一种双功能抗体，包括抗体的重链恒定区和抗体的轻链恒定区，其特征在于，所述双功能抗体还包括分别与所述抗体的重链恒定区和所述抗体的轻链恒定区相连接的第一目的蛋白和第二目的蛋白。

7.根据权利要求6所述的双功能抗体，其特征在于，所述抗体的重链恒定区还包括激活免疫功能的抗体Fc片段。

8.根据权利要求6或7所述的双功能抗体，其特征在于，所述第一目的蛋白为CD4，第二目的蛋白为CCR5。

9.一种双功能抗体基因工程药物，其特征在于，含有权利要求6-8中任一权利要求的双功能抗体。