[发明专利]一种双功能抗体、其构建方法及双功能抗体基因工程药物

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，并涉及一种重组抗体。更具体地，本发明涉及一种包括两种目的蛋白的双功能抗体、其构建方法、以及含有该双功能抗体的基因工程药物。

背景技术

天然存在的抗体分子具有相似的结构，即均具有由两条相同的重链和两条相同的轻链所组成的对称结构。基于该对称结构，可以设计得到类似于天然抗体结构的重组抗体，即保留重链和轻链的保守恒定区结构，而将可变区替换成目标抗体的分子。此时，与重链的可变区和和轻链的可变区相连接的两种不同基因既具有抗体识别的特异性，又能起到不同抗体双重功能的作用。虽然目前已经提出了设计上述重组抗体的概念，但现有技术中尚未建立完善的构建该重组抗体的方法。

发明内容

本发明希望解决的技术问题在于，针对现有技术中尚未建立完善的双功能重组抗体的构建方法，提供一种易于实现且针对特定目标抗原的双功能抗体的构建方法。另外，本发明也提供采用上述方法得到的双功能抗体及包含该抗体的基因工程药物。

本发明希望解决的技术问题通过以下技术方案得以实现：提供一种双功能抗体的构建方法，该方法包括以下步骤：

A：分别获取抗体的重链恒定区基因、抗体的轻链恒定区基因、第一目的基因和第二目的基因；

B：采用表达载体构建包括所述抗体的重链恒定区基因、所述抗体的轻链恒定区基因、所述第一目的基因和所述第二目的基因的重组载体穿梭质粒；

C：将步骤B中形成的重组载体穿梭质粒转染至表达细胞株中进行培养，表达得到所述双功能抗体。

在上述双功能抗体的构建方法中，在所述步骤A中，根据目标抗原决定簇获取所述第一目的基因和所述第二目的基因。

在上述双功能抗体的构建方法中，所述步骤A包括：

设计所述抗体的重链恒定区基因的引物、所述抗体的轻链恒定区基因的引物、所述第一目的基因的引物和所述第二目的基因的引物；

引物1：5’-CCC AAG CTT CCA AAA CGA CAC CCC CAT CTG-3’；

引物2：5’-AAA AGG GAC TCC CCG GTT CAT CTA GGG CGC TTG CCCAAT CAT-3’；

引物3：5’-GTC GCG GCC GC ACT GTG GCT GCA CCA TCT GTC-3’；

引物4：5’-GAA GAG AAA TAA ATA AAC AAT CAT ACA CTC TCC CCTTTT GAA GCT-3’；

引物5：5’-ATG ATT GGG CAA GCG CCC TAG ATG AAC CGG GGAGTC CCT TTT-3’；

引物6：5’-AGA GGA TCC CCA GGT GCC ACT ATC CTG GAG-3’；

引物7：5’-TTC AAA AGG GGA GAG TGT ATG ATT GTT TAT TTT CTCTTC-3’；

引物8：5’-GAA GGTACC CAA GCC CAC AGA TAT TTCCTG-3’；

基于PCR方法，使用引物1和引物2扩增出所述抗体的重链恒定区基因，使用引物3和引物4扩增出所述抗体的轻链恒定区基因，使用引物5和引物6扩增出所述第一目的基因，以及使用引物7和引物8扩增出所述第二目的基因。

在上述双功能抗体的构建方法中，在步骤B中，所述表达载体是pCDNA3.1/His C、pCDNA5/FRT/TO TOPO TA、pEGFP-N1或pBudce4.1。

在上述双功能抗体的构建方法中，在步骤C中，所述表达细胞株为293细胞、AD293细胞或中国仓鼠卵巢细胞。

在上述双功能抗体的构建方法中，所述构建方法还包括离心收集上清或细胞，对所述双功能抗体进行纯化。

根据本发明的另一方面，提供一种双功能抗体，其包括抗体的重链恒定区和抗体的轻链恒定区，所述双功能抗体还包括分别与所述抗体的重链恒定区和所述抗体的轻链恒定区相连接的第一目的蛋白和第二目的蛋白。

在上述双功能抗体中，所述抗体的重链恒定区还包括激活免疫功能的抗体Fc片段。

在上述双功能抗体中，所述第一目的蛋白为CD4，第二目的蛋白为CCR5。

根据本发明的另一方面，提供一种双功能抗体基因工程药物，该双功能基因工程药物含有上述双功能抗体。