[发明专利]一种DNA片段的回收方法

权利要求书

1.一种DNA片段的回收方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、在含有DNA的琼脂糖凝胶条中加入溶胶液，混匀，加热至琼脂糖凝胶条融化；

B、将融化后的溶液静置冷却，加入预冷的异丙醇，混匀，再次静置，琼脂糖析出形成沉淀；

C、分离得到琼脂糖沉淀和含有DNA片段的上清液；

D、分别回收DNA片段和琼脂糖；

步骤A中，所述溶胶夜为弱碱性的异硫氰酸胍溶液。

2.根据权利要求1所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，步骤C后，还包括以下步骤：

在琼脂糖沉淀中加入TE缓冲液洗涤琼脂糖沉淀，溶解残存在琼脂糖沉淀中的少量DNA片段，离心，取上清液与步骤C中的上清液合并。

3.根据权利要求1所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，步骤A中，所述加热的过程为65-75℃水浴加热至琼脂糖凝胶完全融化；所述溶胶液为用TE缓冲液溶解异硫氰酸胍制成，其浓度为0.25-0.40mol/L，pH值为8.0；所述溶胶液的用量为与所述含有DNA琼脂糖凝胶条等体积，或根据DNA片段的含量和琼脂糖凝胶条的浓度，适当调整所述溶胶液的用量；

步骤B中，所述静置冷却过程为置于冰上静置；所述预冷的异丙醇，其预冷温度为-20℃；所述再次静置过程为在冰上静置冷却。

4.根据权利要求1所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，所述回收DNA片段过程包括以下步骤：

a1、在上清液中加入依次异丙醇和醋酸钠溶液，置于低温-18℃至-30℃，沉淀DNA片段；

b1、弃上清液，用乙醇溶液洗涤DNA片段沉淀；

c1、晾干后加入TE缓冲液溶解得到回收的DNA。

5.根据权利要求4所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，在进行回收DNA片段的步骤a1之前，若回收的DNA片段含有较多有机污染物或蛋白质，则需加步骤C所得的上清液用同样体积的酚/氯仿、氯仿分别抽提一次，取上清液。

6.根据权利要求4所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，步骤c1中，若加入TE缓冲液后有沉淀出现，则将沉淀吹打均匀，使DNA片段充分溶解在TE缓冲液中，离心分离，吸取上清液，得到含有DNA片段的上清液。

7.根据权利要求4所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，所述步骤c1中，异丙醇的用量为与待加溶液同等体积；所述醋酸钠溶液的用量为总体积的1/10体积。

8.根据权利要求1所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，所述回收琼脂糖过程包括以下步骤：

a2、在琼脂糖沉淀中加入水，加热溶解，得到琼脂糖溶液；

b2、在琼脂糖溶液加入聚乙二醇溶液，析出琼脂糖沉淀，弃上清液；

c2、用乙醇溶液洗涤琼脂糖沉淀；

d2、在琼脂糖沉淀中加入无水乙醇进行脱水；

e2、烘干，得到琼脂糖粗产品。

9.根据权利要求8所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，步骤a2中，所述加热过程是在98℃至100℃金属浴中加热，加热至琼脂糖沉淀完全溶解。

10.根据权利要求8所述的DNA片段的回收方法，其特征在于，在进行步骤e2以前，重复所述步骤a2～d2一次。