[发明专利]显微镜的控温载物片及其使用光学显微镜观察抗冻蛋白冰晶形态变化的方法

权利要求书

1.一种显微镜的控温载玻片，其特征是将两片载玻片之间设有冷却软管，冷却软管的两端分别与低温冷却循环仪的出口和入口相连接。

2.一种显微镜的控温载玻片，其特征是将两片载玻片之间设有冷却软管，冷却软管出口与蠕动泵的进口端连接，蠕动泵的出口端连接保温盒的入口端，保温盒的出口端与冷却软管入口相连接；在载玻片上设有快速检测探针温度计；在保温盒中有-20℃～-18℃的无水乙醇，保温盒的入口管和出口管分别插入-20℃～-18℃的无水乙醇。

3.一种使用普通光学显微镜观察抗冻蛋白冰晶形态变化的方法，其特征是包括有以下步骤：

（1）.抗冻蛋白的提取；

（2）.制备如权利要求1或2所述的显微镜的控温载玻片;

（3）.吸取10μL浓度为10mg/ml的抗冻蛋白溶液滴于所述的控温载玻片上，调节显微镜，同时控制低温冷却循环仪使载玻片上的样品迅速冷却，速率为0.5℃／min,冷却到-15℃以下，逐渐结冰，待样品充分固化后，以0.05℃/5min的速率熔融冰晶，当冰晶融化体积达到1/3-1/2，温度为-2.15～-2.05℃时降温处理，速率为0.05℃/5min，温度降至-15℃，并观察冰晶生长过程。