[发明专利]用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂及使用方法和应用

权利要求书

1.一种用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂，其特征在于，其组分包括：第一组分和第二组分；

其中，第一组分是将带异硫氰酸基团的化合物溶解于保护异硫氰酸基团的溶剂中所形成的溶液；

第二组分是不含伯氨基的碱性上样缓冲液。

2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述带异硫氰酸基团的化合物，包括：异硫氰酸荧光素和四甲基异硫氰酸罗丹明；

所述保护异硫氰酸基团的溶剂，包括：N,N-二甲基甲酰胺和二甲基亚砜。

3.如权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述第一组分的浓度为0.08～0.12g/100mL；

所述第二组分，为pH8～10的不含伯氨基的碱性上样缓冲液。

4.如权利要求3所述的试剂，其特征在于：所述第一组分的浓度为0.1g/100mL；

所述第二组分为pH8～10的缓冲体系浓度在100mM以上的不含伯氨基的碱性上样缓冲液。

5.如权利要求4所述的试剂，其特征在于：所述第二组分包括：pH8～10的硼酸-氢氧化钠缓冲液或pH7.5～8.5的磷酸盐缓冲液；

其中，pH8～10的硼酸-氢氧化钠缓冲液的配方如下：

将20ml1M pH8～10硼酸-氢氧化钠缓冲液、2mlβ-巯基乙醇、4g SDS、0.1g EDTA、20ml甘油混匀，并定容至100ml；或将20ml1M pH8～10硼酸-氢氧化钠缓冲液、2g二硫苏糖醇、4g SDS、0.1g EDTA、20ml甘油混匀，并定容至100ml；

pH7.5～8.5的磷酸盐缓冲液的配方如下：

将20ml1M pH7.5～8.5磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、2mlβ-巯基乙醇、4g SDS、0.1gEDTA、20ml甘油混匀，用3M氢氧化钠溶液将pH调回7.5～8.5，并定容至100ml；或将20ml1M pH7.5～8.5磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、2g二硫苏糖醇、4g SDS、0.1g EDTA、20ml甘油混匀，用3M氢氧化钠溶液将pH调回7.5～8.5，并定容至100ml。

6.一种如权利要求1所述的试剂在凝胶电泳蛋白质显色中的使用方法，其特征在于，包括：

I、方法A，其步骤包括：

（1）将第一组分与第二组分按比例进行混合，形成处理液；

（2）将步骤（1）形成的处理液与待测蛋白质样品按比例进行混合后，70～100℃加热，形成有色蛋白质样品液，实现对蛋白质的显色；

或II、方法B，其步骤包括：

将第二组分与待测蛋白质样品按比例进行混合后，再加入第一组分，70～100℃加热，形成有色蛋白质样品液，从而实现对蛋白质的显色。

7.如权利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述方法A或方法B中，第一组分中含异硫氰酸荧光素时，第一组分与第二组分以体积比为0.5～1:1的比例进行混合；第一组分中含四甲基异硫氰酸罗丹明时，第一组分与第二组分以体积比为3～5:50的比例进行混合；

方法A的步骤（2）中，处理液与待测蛋白质样品以体积比为530～1000：500的比例进行混合；

方法B中，第二组分与待测蛋白质样品以体积比为1：1的比例进行混合；

方法A或方法B中，加热的时间为3～10分钟。

8.如权利要求7所述的使用方法，其特征在于：所述第一组分中含四甲基异硫氰酸罗丹明时，在1ml pH8～10硼酸-氢氧化钠缓冲液中加入60μl0.1g/100mL四甲基异硫氰酸罗丹明的二甲亚砜溶液；第一组分中含异硫氰酸荧光素时，在1ml pH7.5～8.5磷酸盐缓冲液中加入1ml0.1g/100mL异硫氰酸荧光素的N,N-二甲基甲酰胺溶液。

9.一种如权利要求1所述的试剂的应用，其特征在于：所述用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂在凝胶电泳中的应用，其步骤包括：

①将如权利要求6所述的有色蛋白质样品液直接加入至凝胶加样孔中，连通电源，进行电泳；

②电泳完成后，取出凝胶，直接用肉眼观察蛋白质电泳条带的电泳结果，或将凝胶放入凝胶成像仪中进行观察。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述步骤②中，取出的凝胶还进行传统的蛋白质凝胶染色法或取出的凝胶还用于后续的免疫印迹杂交；

其中，传统的蛋白质凝胶染色法包括：考马斯亮蓝染色法。