[发明专利]用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂及使用方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白质显色试剂及方法，特别是涉及一种用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂及使用方法和应用。

背景技术

蛋白质的凝胶电泳是生命科学研究中最常用的实验方法之一。在蛋白质的凝胶电泳实验中，必须使用染色剂使蛋白质染上醒目的颜色，便于观察结果。现在常用的染色方法如考马斯亮蓝染色法、银染法等，需要在蛋白质的凝胶电泳结束之后对凝胶进行固定、染色、脱色等繁琐处理才能观察，耗时长，不可能快速知晓实验结果，也不便于在实验过程中观察结果。且固定、染色、脱色需要大量试剂（尤其是有机溶剂）浸泡凝胶，使用量很大，增加了对环境的污染。对于以上情况，现有的改进方法有：1)使用微波炉加热以加快反应速度；2)调整染色液配方以提高染色效率等。但是以上的方法都没有从本质上改变凝胶电泳实验中蛋白质染色步骤繁琐、污染严重等问题，而且染色仍然必须在电泳结束后才能进行。

故而，需要一种同时具备可靠性、可推广性、快速简便、无污染性的凝胶电泳蛋白质显色方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂及使用方法和应用。本发明中的采用该试剂的显色方法有别于传统凝胶电泳中蛋白质染色方式的蛋白质显色方法，而且本发明的显色方法弥补了几种传统染色方式的不足，而且在电泳环境下很稳定。

为解决上述技术问题，本发明的用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂（快速显色剂），其组分包括：第一组分和第二组分；

其中，第一组分是将带异硫氰酸基团（—NCS）的化合物溶解于保护异硫氰酸基团（—NCS）的溶剂中所形成的溶液，即带异硫氰酸基团（—NCS）的化合物溶液；

第二组分是不含伯氨基（—NH₂基团）的碱性上样缓冲液。

所述带异硫氰酸基团（—NCS）的化合物，是带异硫氰酸基团（—NCS）的色素或者荧光素，包括：异硫氰酸荧光素（FITC）和四甲基异硫氰酸罗丹明（Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate，TRITC）等。

所述保护异硫氰酸基团（—NCS）的溶剂，包括：N,N-二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亚砜（DMSO）等。

所述第一组分的浓度推荐为0.08～0.12g/100mL（如0.1g/100mL）或者饱和浓度以下的其他浓度，视色素或荧光素的种类不同而不同。

所述第二组分，可采用常规的不含伯氨基（—NH₂基团）的碱性缓冲液即可，如可采用pH8～10的不含伯氨基（—NH₂基团）的碱性上样缓冲液（缓冲体系浓度优选为100mM以上），如包括：pH8～10的硼酸-氢氧化钠缓冲液（缓冲体系浓度优选为100mM以上）或pH7.5～8.5的磷酸盐缓冲液（缓冲体系浓度优选为100mM以上）及其他缓冲液。

其中，pH8～10的硼酸-氢氧化钠缓冲液的配方（100ml）如下：

将20ml1M pH8～10硼酸-氢氧化钠缓冲液（即Na₂B₄O₇-NaOH）、2mlβ-巯基乙醇、4g SDS（十二烷基磺酸钠）、0.1g EDTA（乙二胺四乙酸）、20ml甘油混匀，并定容至100ml或将20ml1M pH8～10硼酸-氢氧化钠缓冲液、2g二硫苏糖醇、4g SDS、0.1g EDTA、20ml甘油混匀，并定容至100ml。

pH7.5～8.5的磷酸盐缓冲液的配方（100ml）如下：

将20ml1M pH7.5～8.5磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、2mlβ-巯基乙醇、4g SDS、0.1gEDTA（乙二胺四乙酸）、20ml甘油混匀，用3M氢氧化钠溶液将pH调回7.5～8.5，并定容至100ml或将20ml1M pH8～10磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、2g二硫苏糖醇、4g SDS、0.1g EDTA、20ml甘油混匀，用3M氢氧化钠溶液将pH调回7.5～8.5，并定容至100ml。

另外，本发明还公开了用于凝胶电泳蛋白质显色的试剂（快速显色剂）在凝胶电泳蛋白质显色中的使用方法，包括：

I、方法A，其步骤包括：

（1）将第一组分与第二组分按比例进行混合，形成处理液；

其中，不同的带异硫氰酸基团的化合物（即带异硫氰酸基团的色素或荧光素）所需要的混合比例不同，如可根据待测蛋白样品浓度进行调整，以蛋白摩尔数略低于所加含有异硫氰酸基团（—NCS）的色素或荧光素为最宜，也可以自行摸索；