[发明专利]牦牛乳酪蛋白抗凝血肽的制备方法

权利要求书

1.一种牦牛乳酪蛋白抗凝血肽的制备方法，其特征是包括以下步骤：

（1）溶解：称取牦牛乳酪蛋白10-50g，加水500mL，调节反应温度30～50℃，pH5.5～7.5，搅拌，使牦牛乳酪蛋白溶解；

（2）酶解：称取0.25g～2.5g胰蛋白酶加入，维持反应温度30～50℃，pH5.5～7.5，反应1～4小时；

（3）灭酶，升温至80～100℃，维持5～15分钟；

（4）沉淀酪蛋白：用5mol/L盐酸调节pH到4.6，使酪蛋白在其等电点处析出；

（5）离心：4000～10000g离心力，离心除去酪蛋白沉淀，留上清液；

（6）喷雾干燥：取离心上清液，采用喷雾干燥机，对产品进行喷干，得到牦牛乳酪蛋白抗凝血肽。

2.如权利要求1所述的牦牛乳酪蛋白抗凝血肽的制备方法，其特征是还包括以下步骤：

（7）分离纯化：配制浓度为1%～5%的步骤（6）得到的牦牛乳酪蛋白抗凝血肽进行上样，利用Sephadex G-15分离纯化，洗脱液为磷酸缓冲液pH6.8、0.02mol/L，收集在280nm处具有吸收峰的组分；

（8）活性检测：采用琼脂糖-纤维蛋白平板法检测各组分活性；

（9）分子量及氨基酸序列测定：利用N端序列测定方法，确定四组抗凝血肽氨基酸序列结构，分别是来自a-S1酪蛋白91-100，8-22，4-22和β-酪蛋白177-183。

3.如权利要求1所述的牦牛乳酪蛋白抗凝血肽的制备方法，其特征在于所选用的分离纯化方式为葡聚糖凝胶柱分离。

4.如权利要求2所述的牦牛乳酪蛋白抗凝血肽的制备方法，其特征在于所述的确定四组抗凝血肽氨基酸序列分别是所述的a-S1酪蛋白91-100为YLGYLEQLLR；所述的a-S1酪蛋白8-22为HQGLPQEVLNENLLR；所述的a-S1酪蛋白4-22为HPIKHQGLPQEVLNENLL；所述的β-酪蛋白177-183为AVPYPQR。