[发明专利]一种酶活和热稳定性提高的谷氨酰胺转胺酶突变体及其构建方法有效
| 申请号： | 201310315275.X | 申请日： | 2013-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN103421753A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;王广圣;陈康康;刘松;堵国成 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/74;C12R1/55 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自刚;王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 热稳定性 提高 谷氨酰胺 转胺酶 突变体 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种酶活和热稳定性提高的谷氨酰胺转胺酶突变体，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述谷氨酰胺转胺酶突变体的构建方法，其特征在于具体步骤为：1）通过PCR或化学全合成的方法获得Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062，得到谷氨酰胺转胺酶基因序列及其上下游序列，序列如Genbank：EU477523所示，克隆到表达载体；2）通过缺失突变获得Del1-4谷氨酰胺转胺酶突变体；3）以在步骤2）获得的突变体基础上，通过定点突变对E62进行突变，获得突变体Del1-4/E62D谷氨酰胺转胺酶突变体；4）在步骤3）获得的突变体基础上，融合tag1获得如SEQ ID NO.1所示的谷氨酰胺转胺酶突变体，转化大肠杆菌获得含有谷氨酰胺转胺酶突变体的工程菌。
3.权利要求1或2所述的谷氨酰胺转胺酶突变体，其特征在于所述表达载体为pBB1-1011。
4.一种发酵生产权利要求1所述谷氨酰胺转胺酶突变体的方法，其特征在于以权利要求2所述的含有谷氨酰胺转胺酶突变体的工程菌为生产菌株，利用TB培养基，诱导菌体密度OD600为8，诱导温度为20℃，诱导剂IPTG浓度为0.4mmol/L，获得谷氨酰胺转胺酶突变体。
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