[发明专利]一种丙型肝炎病毒吸附剂及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于医疗生物材料领域，具体涉及一种丙型肝炎病毒吸附剂及其制备方法与应用。

背景技术

丙型肝炎由丙肝病毒（HCV）引起，分布极广，容易演变为慢性肝炎、肝硬化和肝癌。除极少数急性丙型肝炎可以治愈外，绝大多数患者一旦染病终身带病。目前尚无完全有效的治疗方案，临床上也无疫苗；唯一公认有效的治疗手段仅有干扰素，而且必须在感染的早期实施，否则无明显的效果。

血液中的病毒是丙型肝炎的致病因子。虽然已经有了早期的探索，但仍未定论的是如何特异、有效地从血液中清除这些病毒，而又不造成对机体的损害。亲和吸附治疗是血液净化的一种重要方法，其原理是将某一种或几种配基固定在稳定无热源的载体上构建成亲和吸附柱，通过体外循环的方式清除患者血液中的致病因子，净化血液，打破免疫平衡，改善体内微环境，使免疫系统处于优势，从而辅助其他治疗手段的实施。当前临床上应用血液净化疗法能够通过特异性地清除机体的自身抗体，治疗自身免疫性疾病、器官移植排斥反应，还有报道通过吸附低密度脂蛋白治疗高胆固醇血症等。然而，利用指数富集的配基系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX）筛选出来的适配子吸附血浆中的丙肝病毒还未见报道。

常见的适配子分子包括单链DNA与单链RNA，是一类有特殊空间结构的核糖核酸，这些结构赋予它们同靶分子高效物理接合的能力，二者间形成特异紧密的“锁－钥”结构。此项技术发端于探索早期生命形态的研究，现已广泛应用在靶向药物、高效快速检测等诸多方面。通过随机合成的单链核糖核酸与靶分子的多轮结合与冲洗，筛选出与靶分子最具接合效率的核糖核酸序列。当前已出现多种成熟的合成方法，易于对其进行工业化生产，例如：微球磁珠法、不对称PCR等。近来的实践表明，这类分子能够高效、快速、特异的俘获靶分子，为特异性清除血液中的病毒提供了有效的工具。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种无毒、无害、无免疫源性、丙肝包膜蛋白吸附效率高并且安全性能良好的丙型肝炎病毒吸附剂，其能特异性清除血浆中丙型肝炎病毒颗粒。

本发明的另一目的在于提供上述丙型肝炎病毒吸附剂的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述丙型肝炎病毒吸附剂的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种丙型肝炎病毒吸附剂，包含载体及连接在载体上的结合丙型肝炎病毒包膜蛋白的单链脱氧核糖核酸配基；所述的连接优选为通过化学偶联的方式固定；其具有如下结构：

其中：代表载体，Linker代表活化偶联手臂基团，anti-HCVaptamer代表特异性结合丙型肝炎病毒包膜蛋白的单链脱氧核糖核酸配基。

所述的载体优选为玻璃、琼脂糖、壳聚糖等具有光滑表面及活化基团的材料微球，微球直径应处于45μm至165μm之间。玻璃是常被用于固定DNA的一种安全材料，制作工艺成熟而且简单，质量可控制性强，容易获得尺寸均一的玻璃微球；其表面光滑，血液相容性好，已在相关产品中作为支持载体使用。此外，琼脂糖、壳聚糖及陶瓷等具有光滑表面及活化基团的材料，均能作为支持载体。

所述的结合丙型肝炎病毒包膜蛋白的单链脱氧核糖核酸配基优选为在结合丙肝病毒的适配子序列（该序列为公开文献Chen F,Hu Y,Li D,Chen H,Zhang X-L(2009)CS-SELEX Generates High-Affinity ssDNA Aptamers as Molecular Probes for Hepatitis C Virus Envelope Glycoprotein E2.PLoS ONE4(12):e8142中对丙型肝炎病毒包膜蛋白E2有高效接合能力的单链DNA适配子的核苷酸序列）的5’和3’端分别添加长度为10～25nt的支持手臂的核苷酸链。支持手臂的作用有两点：1）作为适配子自身序列与微球的延伸，保护适配子折叠时所需要的空间位阻；2）可以同时作为原位PCR合成时固定在球珠上的引物序列，简化适配子球珠的生产工艺。

其中，结合丙肝病毒的适配子序列（SEQ ID NO.1）如下所示：