[发明专利]牛病毒性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种牛病毒性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒的应用，其特征在于该试剂盒主要用于疫苗生产中牛源原材料污染BVDV的检测以及猪和牛的BVDV感染的检测。

2.如权利要求1中所述牛病毒性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于该试剂盒含有阳性对照，阴性对照，RT-PCR反应液、反应酶、探针溶液、无酶水，其中

阳性对照：为BVDV Oregon毒株MDBK细胞传代产物（病毒滴度为10^5.5TCID₅₀/0.1ml），经甲醛37℃灭活后分装备用。

阴性对照：为猪瘟病毒兔化弱毒株（HCLV）牛睾丸细胞培养产物，经甲醛37℃灭活后分装备用。

RT-PCR反应液：每个反应包括10×PCR Buffer 5μL、dNTP Mixture 1.5μL、BVDV-F（10μM）1.5μL、BVDV-R（10μM）3μL，共11μL，其中引物的序列为：

序列1，BVDV-F：5’-(T/C)GAGT(T/C)C(G/A)TTGGATGGC(T/C)(T/G)AA(G/C)-3’

序列2，BVDV-R：5’-(C/A)(A/G)(A/G)(G/A)G(C/T)GTCGAACCACTGA-3’；

反应酶：每个反应包括SSⅢ^TM反转录酶0.3μL、TaqHSDNA聚合酶0.5μL;

探针溶液：用无酶水将探针BVDV-P稀释成5μM的探针BVDV-P溶液，每个反应需3μL，探针的序列为：

序列3，BVDV-P：5’-FAM-CCTGAGTACAGGG(T/G)AGTC-MGB-3’

无酶水：超纯水高压灭菌后，加入终浓度为0.1%的焦碳酸二乙酯（DEPC），处理过夜，第二天高压灭菌以去除DEPC。