[发明专利]一种蜡蚧菌蛋白酶分离纯化的方法

权利要求书

1.一种从蜡蚧菌分离纯化蛋白酶的方法，其特征在于包括以下步骤：

（a）粗酶液的制备: 用培养基培养蜡蚧轮枝菌L. lecanii FJ28菌株，在培养发酵液中在蛋白酶活性达最高时取发酵液离心，上清液用真空抽滤，收集滤液；向滤液中加入固体硫酸铵至饱和度为60%wt，4℃静置过夜；再次离心收集沉淀，用缓冲液溶解沉淀；离心溶解液除去不溶物体，上清液装于透析袋，经缓冲液透析后，再用聚乙二醇浓缩得到粗酶液；

DEAE Sepharose fast flow阴离子交换柱层析: 粗酶液上样于用缓冲液平衡过夜充分平衡后的DEAE Sepharose fast flow阴离子交换柱层析，再用含0-1mol/L NaCl的0.02mol/L Tris-HCl缓冲液pH=8.0缓冲液进行连续洗脱,收集具有酶活性部份；

Sephadex G-150分子筛层析: 用缓冲液充分平衡Sephadex G-150分子筛层析柱，将步骤(b)收集的收集具有酶活性部份上于其中，再用缓冲液进行洗脱；收集有酶活性的部份；

步骤 （a）、（b）、（c）中缓冲液为缓冲液为0.02mol/L Tris-HCl缓冲液pH=8.0。

2.在根据权利1所述的蜡蚧菌蛋白酶的分离纯化方法，其特征在于步骤（a）中三次离心转速均为11000 rpm，但首次离心是在常温下时间为10min，后两次则是4℃条件离心15min。

3.根据权利1所述的蜡蚧菌蛋白酶的分离纯化方法，其特征在于步骤（b）中洗脱条件设置为：流速30mL/h；5mL/管。

4.根据权利1所述的蜡蚧菌蛋白酶的分离纯化方法，其特征在于步骤（c）中洗脱条件设置为：流速15mL/h；5mL/管。