[发明专利]一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及杜鹃花科杜鹃花属中马缨杜鹃的快速繁殖方法及其培养基。

背景技术

马缨杜鹃（Rhododendron delavayi Franch），又名马缨花，别名马鼻缨、牛血花、狗血花、红山茶、密桶花，为杜鹃花科杜鹃花属常绿杜鹃组树形杜鹃亚组，其主干明显，花冠钟形，红色，叶密背灰白色海绵状绒毛。马缨杜鹃一般为小乔木，花大色艳，树姿优美，观赏价值高，主要分布于云南、贵州、四川、西藏等西南较高海拔地区，为较易驯化的原生杜鹃种类之一，在园林绿化开发中极具应用价值。

目前，马缨杜鹃的繁殖方法主要包括靠挖取野生资源，但此方法移栽成活率不高，且对野生资源破坏严重。扦插方法因枝条粗壮且受季节影响，不能实现大规模生产。种子播种方法繁殖系数高，但实生苗开花需要至少6年以上，开花周期长，不能满足园林绿化的广泛应用。因此采用组织培养技术是实现对马缨杜鹃大规模繁殖的重要途径，可以减少对野生资源的破坏，加快原生杜鹃的驯化进程及园林上的应用。

近年来，对马缨杜鹃的组织培养研究已有较多报道。周艳等（安徽农业科学，2007（35）：9213-9214）、程雪梅等（植物生理学通讯，2008（44）：297-298）、洪怡等（西南大学学报（自然科学版）2012，34（8）：61-66）相继对马缨杜鹃进行了组培研究，均获得了组培苗，但是上述研究均是基于种子发芽后的茎段为外植体，所获得的组培苗仍要经过多年栽培种植后才能开花。此外，通过种子途径建立的快繁体系的组培苗生长弱，茎段不够粗壮，移栽后生长速度慢，因此其组培体系存在一定的缺陷。本发明针对马缨杜鹃植物学特征，利用已开花的母株茎段为外植体，建立了马缨杜鹃高效的组培快繁体系，增殖系数控制在5-6倍，培养的组培苗茎段粗壮，并实现了瓶外生根技术。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明的一个目的是利用已开花植株为外植体，提供一种提高马缨杜鹃组培效率的培养基及培养方法，为马缨杜鹃苗木的工厂化繁育提供技术支撑。本发明的另外一个目的是提供一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖培养基。

为了实现上述的第一目的，本发明采用了以下的技术方案： 

一种马缨杜鹃组织培养快速繁殖方法，该方法按如下步骤进行：

1）外植体的选择：春季或秋季从已开花马缨杜鹃母株上剪取带有4-6个潜伏芽的当年生新发枝条；

2）外植体灭菌：剪去枝条叶片，先用自来水浸泡并冲洗30-60分钟，用洗洁精洗涤1-2次后吸干；然后，在无菌室超净台上用75%酒精消毒15-30秒，用无菌水冲洗3-5遍，再用0.1％氯化汞消毒12-15分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3-5遍后吸干；

3）新发枝条诱导培养：将灭好菌的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成2-3cm长的茎段，每段带有1-2个腋芽，斜插入诱导培养基中；于23-26℃光16小时，黑8小时培养25-35天后，茎段潜伏芽发育生长出新枝条至2-4cm长；所述的诱导培养基由以下组分构成：WPM基本培养基 + ZT 3.0-4.0 mg/L + NAA0.2-0.4 mg/L + 20 g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH4.8-5.2，高温灭菌；

4）增殖培养：剪取新长出的枝条，去顶芽后插入增殖培养基中，于23-26℃光16小时，黑8小时，培养45-60天后，茎段长出丛生芽；此阶段可重复进行；所述的增殖培养基由以下组分构成： WPM基本培养基 + ZT 1.0-2.0 mg/L + NAA 0.1-0.2 mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH 4.8-5.2，高温灭菌；

5）壮苗培养：将长到1-2cm长的丛生芽剪切移入壮苗培养基中，于23-26℃光16小时/黑8小时，培养25-35天，待长到3-5cm后移入基质中，进行瓶外生根；所述的壮苗培养基由以下组分构成：WPM基本培养基 + ZT 0.5-1.0 mg/L + NAA0.05-0.1 mg/L + 20g/L 蔗糖或白糖 + 6-10 g/L 琼脂，pH 4.8-5.2，高温灭菌；

6）瓶外生根：在每年10至次年3月，将长到3-5 cm高的瓶苗在室外放置1周，洗去枝条上的琼脂后移入含有含泥炭：珍珠岩：蛭石体积比2：1：1的基质中，在保湿保温条件下生长，1-2个月后生根。

为了实现上述的第二目的，本发明采用了以下的技术方案：