[发明专利]采用菌丝摇瓶培养催生紫丁香蘑孢子及液体深层发酵工艺

说明书

技术领域

 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种采用菌丝摇瓶培养催生紫丁香蘑孢子及其液体深层发酵的工艺。 

背景技术

 紫丁香蘑(Lepista nuda)隶属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、伞菌亚纲(Agaricomycetidae)、伞菌目(Agaricales)、口蘑科(Tricholomataceae)、香蘑属(Lepista)，是一种珍稀的食药用菌。

 据《日用草本》等史料记载，紫丁香蘑具有很高的食用及药用价值。长期食用能有效地防止血管硬化，治疗肾脏病、胆结石、糖尿病、肝硬化等疾病。现代研究表明，经常食用紫丁香蘑能调节人体正常糖代谢，促进神经传导；其热水提取物具有显著抗癌活性，对小白鼠肉瘤S180的抑制率为90％，对艾氏瘤的抑制率为100％。此外还发现紫丁香蘑具有抗菌和抗氧化活性。

 紫丁香蘑也是一种名贵的食材，尽管在欧洲等地已能人工栽培，但是产量低，然而其野生资源有限。我国现在处在紫丁香蘑的驯化栽培阶段, 还没有商业化生产。

  目前关于紫丁香蘑的国内外研究报道少， 关于紫丁香蘑孢子的研究还未见报道， 也没有关于紫丁香蘑菌丝在液体深层发酵过程中产生大量孢子的报道。我们对紫丁香蘑孢子的初步研究发现其粗蛋白和粗脂肪含量分别为27.14%和10.26%，其水抽提物在线虫实验中显示出明显的抗热激抗氧化功能。然而，对紫丁香蘑孢子进行研究开发首先需要大量的紫丁香蘑孢子。食药用菌的孢子一般由成熟的子实体释放产生，通常情况下很难从菌丝直接产生。此外，也没有紫丁香蘑子实体能像灵芝子实体那样产生大量孢子的报道。如果通过液体深层发酵能制备出紫丁香蘑孢子就可以供研究和开发利用。目前，国内外尚没有关于紫丁香蘑孢子发酵生产方法的报道。

发明内容

 本发明的目的是提供一种采用菌丝摇瓶培养催生紫丁香蘑孢子及其液体深层发酵的工艺。 

  本发明的目的通过以下方案实现：采用菌丝摇瓶培养催生紫丁香蘑孢子及液体深层发酵工艺,按照下述步骤进行：

  （1）将紫丁香蘑菌丝体转接至斜面培养基中，22-28℃培养168-312小时；

  （2）将步骤（1）中的斜面菌种转接入装有摇瓶培养基的摇瓶中，24-28℃培养，转速100-180rpm，培养72-288小时。发酵液会变成粉红色，显微镜检验可以发现其中有大量孢子存在；

  （3）将含孢子的发酵液在平皿培养基上进行划线，22-28℃培养72-168小时，挑红色单菌落转接至试管斜面培养基培养保存或将发酵液直接作为菌种进行紫丁香蘑孢子的液体深层发酵以便获得大量孢子；

  （4）将步骤（2）中含紫丁香蘑孢子的发酵液按2%-6%的接种量转接入装有种子培养基的种子罐中，24-28℃培养，转速100-150rpm，通气量0.5-2vvm，培养36-72小时；

  （5）将步骤（4）中的发酵液按体积比2%-6%的接种量转接入装有发酵培养基的发酵罐中，24-28℃培养，转速100-150rpm，通气量0.5-2vvm，培养36-96小时。

  其中步骤（1）中的斜面培养基（g/L）：马铃薯150-200，葡萄糖15-20，琼脂15-20，pH自然。

其中步骤（2）中的摇瓶培养基（g/L）：马铃薯150-200，葡萄糖15-20，黄酒糟5-20，pH自然。

  其中步骤（3）中的平皿培养基与步骤（1）中的斜面培养基相同。

  其中步骤（4）中的种子罐培养基（g/L）：葡萄糖15-30，黄酒糟15-30，pH自然。

  其中步骤（5）中的发酵培养基（g/L）：葡萄糖20-60，黄酒糟20-60，pH自然。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用方法，在不脱离本发明上述基本技术方法前提下，还可以做出多种其它形式的修改、替换和变更。

本发明的有益效果是：该发明方法提供了一种简便的由菌丝制备出紫丁香蘑孢子及采用黄酒糟作为主要培养料进行紫丁香蘑孢子深层发酵的方法，解决了当前进行紫丁香蘑孢子的研究和开发时无法获得大量孢子的问题，同时该孢子也可以用于紫丁香蘑菌种的长期保藏。

 

具体实施方式

  以下通过实例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1