[发明专利]奥沙利铂药物组合物及应用

说明书

[技术领域]

本发明涉及奥沙利铂类结肠癌治疗药物和应用，特别涉及CCDC88A和TOP2B抑制剂和奥沙利铂的药物组合物及应用。 

[背景技术]

奥沙利铂作为第三代铂类药物，广泛用于结直肠癌辅助治疗的一线方案。奥沙利铂发挥细胞毒性作用的机制是在细胞内通过代谢产物与DNA交联形成DNA复合物，从而终止肿瘤细胞的复制、导致细胞凋亡。研究表明只有40%患者从中获益，但是仍然有一部分患者治疗失败。其主要的原因是对于奥沙利铂化疗药物原始或获得性的耐药性。这种耐药性的产生包含化疗药物的运输、DNA修复、DNA损伤耐受和凋亡等多个因素的参与。如何提高奥沙利铂为主的结直肠癌化疗敏感性成为当前临床研究和基础研究的热点问题。 

CCDC88A（Gene ID: 55704），属激酶调节蛋白，它的C端含有GEF（Guanine nucleotide Exchange Factor）结构域，能够与G蛋白I 型α亚基（Giα）结合，释放Gβγ亚基，从而活化细胞内激酶，进而调控细胞内信号通路，在肿瘤细胞生长和转移过程中起重要作用。有研究表明CCDC88A在进展期结直肠癌中的表达有明显升高并且影响结直肠癌患者预后。目前发现CCDC88A主要通过调控EGFR和PI3K信号通路调控肿瘤细胞生长和转移。CCDC88A在细胞内通过GEF结构域结合Giα，同时其C端与EGFR结合，形成Giα-GIV-EGFR复合物，EGFR发生磷酸化，进而导致下游PI3K，AKT和PLCγ磷酸化，促进细胞迁移；当CCDC88A的1685位氨基酸发生突变（F1685A）后，不能和G蛋白 结合，EGFR磷酸化水平下降，但是SRC和ERK磷酸化水平升高，也可以促进细胞分裂和增殖。EGFR、PI3K和AKT的磷酸化水平除了与肿瘤细胞的转移有关之外，还与肿瘤细胞对药物的抗性有关，在铂类耐药的肿瘤细胞中均发现EGFR和PI3K磷酸化水平比非耐药细胞要高。既然CCDC88A可以激活与化疗耐药相关的EGFR和PI3K通路，因此，有理由认为CCDC88A可以促进肿瘤细胞的耐药，从而影响肿瘤的预后。 

TOP2B（Gene ID: 55704）属于TOP2家族成员，这个家族还有TOP2A。TOP2是机体内重要的核酶，具有调整DNA拓扑结构的作用，它参与了DNA的复制、转录、翻译及染色体的分离、损伤修复等过程。TOP2A在增殖细胞和肿瘤细胞等含量较高，其浓度与细胞的增殖状态紧密相关，快速增殖细胞是静止细胞表达的数倍，G₀/G₁其含量较低，在S期开始增加，G₂/M期表达达到高峰。TOP2B的表达无细胞周期性差异，其浓度在细胞周期中保持相对恒定。因此推测TOP2A和TOP2B的功能，TOP2A可能负责在DNA复制后期解开两个相互交联的染色质单体以及重组细胞分裂后期DNA；而TOP2B负责DNA复制、转录等过程。由于TOP2在细胞代谢中的重要作用，因此其成为肿瘤靶点被应用到恶性肿瘤的治疗中。这些抗TOP2的靶向药物按照其作用方式可以分为两种：TOP2毒剂和TOP2催化抑制剂。TOP2毒剂的代表药物有依托泊苷（Etoposide，VP16）和阿霉素（Adriamycin，ADM），其作用方式是通过提高可切割复合物的稳态浓度使TOP2从酶变成生理毒剂，形成TOP2-药物-DNA复合物，使细胞基因组DNA断裂，从而导致细胞变异或启动一系列事件导致细胞死亡。这些药物是目前临床上常用抗癌药物，是淋巴瘤、肺癌等恶性肿瘤的首选药物。TOP2催化抑制剂的代表药物有新生霉素、阿柔比星等，其作用方式通过抑制催化反应中的某一步骤或阻滞TOP2的某一特定功能，进而抑制TOP2的总体催化活性。 

[发明内容]

为了增加奥沙利铂对于结肠癌细胞的敏感性，提供一种以CCDC88A和TOP2B作为新的靶点的奥沙利铂药物组合物。 

用MTT法检测17种结直肠癌细胞系对奥沙利铂敏感性，确定了奥沙利铂对17株细胞的半致死浓度（IC50）和奥沙利铂不敏感细胞株。通过筛选针对CCDC88A mRNA的4个靶点的siRNA，选择干扰效率最高的序列设计shRNA, 其碱基正向序列如SEQ ID NO:1所示，其碱基反向序列如SEQ　ID:2所示。