[发明专利]湿法球磨联合酶法提取黑豆多肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品成分提取工艺领域，涉及湿法球磨联合酶法提取黑豆多肽的方法。

背景技术

黑豆，民间多称黑小豆和马科豆，有豆中之王的美称。黑豆在国外研究较少，国内已有初步研究。黑豆防老抗衰，药食俱佳，与黄豆同属大豆类。黑豆具有高蛋白、低热量的特性，其蛋白质含量高达36%～40%。研究表明，黑豆除富含优质蛋白质外，蛋白质水解后的多肽也含有许多的抗氧化成分，多肽易吸收还可以降低胆固醇等作用。利用蛋白酶水解大豆蛋白，可以得到肽、氨基酸等营养物质，大大提高了大豆蛋白的营养价值。酶水解法条件温和且不会造成环境污染，目前主要采用木瓜蛋白酶对黑豆豆粕进行水解，制备黑豆多肽，而酶水解时间长，效率低，因此本发明主要提供一种条件温和、效率高的黑豆多肽提取方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种条件温和，无污染，效率高，黑豆多肽提取的方法，从而进一步实现提高黑豆的附加值。

为了实现上述目的，本发明提出如下技术方案：

湿法球磨联合酶法提取黑豆多肽的方法，包括以下步骤： 

（1）球磨粉碎：取100-200g的脱脂黑豆豆粕粉至于玛瑙罐中，加入物料重量3-5倍的水，并加酶10-40U/g，采用行星式球磨机(XQM-20L, 南京科析试验仪器研究所)在转速为250-400rpm条件下对黑豆豆粕粉进行湿法粉碎1-3h得到超细粉体悬浊液；

（2）酶水解：将悬浊液与球罐分离，取2-3倍的水冲洗球罐，合并2次悬浊液。向溶液中补充水量至干物浓度为50-100g/l，利用质量比为2%的氢氧化钠和体积比为1%的盐酸，调整pH至6.0，继续加入15-30U/g的木瓜蛋白酶；

（3）离心分离：在60℃条件下酶解30-60min后离心得上清液即多肽溶液。 

还包括对所述多肽溶液脱色提纯的步骤：

脱色提纯：在粗制的多肽溶液中加入黑豆豆粕粉重量1.5-2.5%的活性炭，在55-60℃下搅拌反应60min，15000rpm离心20min，上清液为脱水多肽溶液；将脱色后的多肽溶液利用Sephadex G15凝胶柱分离脱盐，分离条件为：上样量5ml，洗脱液为蒸馏水，流速为2.0ml/min，收集洗脱时间40min-60min内组分，浓缩、冷冻干燥，得到活性多肽。

步骤(1)中加酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶，纤维素酶用量为5-10u/g，木瓜蛋白酶用量为15-30u/g；步骤(3)中所述离心的转速为5000-10000rpm，时间10-30min。

本发明采用木瓜蛋白酶(4000U/mg，北京鼎国生物试剂有限公司)、纤维素酶(2000U/mg，北京鼎国生物试剂有限公司)。

本发明提供了湿法球磨联合酶法提取黑豆多肽的方法，提高了提取效率。

本发明的技术方案，将球磨超微粉碎、水、木瓜蛋白酶三者联合，对脱脂黑豆豆粕粉进行超微粉碎，颗粒细化，细胞破碎，蛋白质等大分子物质更加容易水解，使多肽转化率大幅度提高。采用双缩脲法检测溶液中多肽的含量，计算脱脂黑豆豆粕粉多肽的转化率最高可达85%。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但不能理解为对本发明的限制。

实施例 1

取一定量100g的脱脂黑豆豆粕粉至于玛瑙罐中，加入物料重量300ml水，并加纤维素酶5u/g，木瓜蛋白酶用量为15u/g，采用行星式球磨机(XQM-20L, 南京科析试验仪器研究所)在转速为250rpm条件下对黑豆豆粕粉进行湿法粉碎3h得到超细粉体悬浊液；

酶水解：将悬浊液与球罐分离，取200ml的水冲洗球罐，合并2次悬浊液。向溶液中补充水量1500ml，使物料浓度为50g/l，利用质量比为2%的氢氧化钠和体积比为1%的盐酸，调整pH至6.0，继续加入20U/g的木瓜蛋白酶；

离心分离：在60℃条件下酶解30min后离心得上清液即多肽溶液，离心的转速为5000rpm。采用双缩脲法检测溶液中多肽的含量，计算脱脂黑豆豆粕粉多肽的转化率为85%；