[发明专利]抗体纯化方法

说明书

本申请是2009年5月15日提交的题为“抗体纯化方法”的国家申请号为200980118361.3(PCT/EP2009/055900)的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及重组表达抗体的纯化。

背景技术

抗体纯化方法通常基于捕获亲和色谱，通常为Protein A，然后是离子交换和/或疏水作用和/或混合模式色谱步骤。此类方法通常还包括至少两个病毒清除步骤，通常通过亲和步骤洗脱液的低pH和在所述方法合适位置放置病毒过滤器清除。mAb纯化方法去除的杂质包括半抗体、抗体片段、二聚体、以及聚集体、DNA、病毒、HCP、Protein A渗漏物、内毒素以及其它相关杂质。

Protein A为一种最初发现于细菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)细胞壁的40-60kDa表面蛋白。业已发现，由于其结合免疫球蛋白，尤其是IgG的能力，该蛋白已用于生物化学研究。该蛋白通过与重链相互作用结合免疫球蛋白的Fc区域。

WO9856808和WO2005016968描述了Protein A纯化的示例。

Protein A纯化还描述于WO2004076485、US20070060741和Kelley BD Biotechnol Bioeng.101.(3).553-66(2008)。

持续需要工业生产重组抗体的有效方法。

发明内容

本发明涉及一种从悬浮液中纯化抗体复合物的方法，所述悬浮液包含所述抗体复合物，其中

i)所述悬浮液在某些条件下接触Protein A衍生物/类似物，其中所述Protein A衍生物/类似物结合所述抗体复合物，

ii)使用合适的缓冲液洗涤所述Protein A衍生物/类似物结合的抗体，以及

iii)使用合适的缓冲液将所述抗体复合物从所述Protein A衍生物/类似物洗脱并收集在所得洗脱物中。

本发明涉及一种从悬浮液中纯化抗体复合物的方法，所述悬浮液包含所述抗体复合物，其中

i)所述悬浮液在某些条件下接触对所述抗体具有亲和力的配体，其中所述配体结合所述抗体复合物，

ii)使用合适的缓冲液洗涤所述配体结合的抗体，

iii)使用合适的缓冲液将所述抗体复合物从所述配体洗脱并收集在洗脱物中，以及

来自步骤iii)的洗脱物进行阳离子色谱。

本发明涉及一种抗体纯化平台，所述平台包含根据本发明的方法。

本发明涉及一种工业生产抗体的方法，其中所述方法包含根据本发明的方法。

详细说明

抗体纯化的常规方法为本领域所熟知，例如Pete Gagnon：Purification Tools for monoclonal Antibodies(单克隆抗体的纯化工具)(1996)ISBN-9653515-9-9中描述的方法。本发明涉及开发抗体复合物纯化的新方法。在本申请上下文中，抗体复合物为免疫球蛋白。术语“免疫球蛋白”系指一种分子，其属于一类结构相关的糖蛋白，由两对多肽链组成，一对轻(L)链和一对重(H)链，全部4条链通过二硫键相互连接。免疫球蛋白的结构已充分鉴定。参见例如Fundamental Immunology Ch.7(Paul，W.，编辑，第2版.Raven Press，N.Y.(1989))。简而言之，每条重链通常由重链可变区(V_H)和重链恒定区(通常包含3个结构域，C_H1、C_H2、和C_H3)组成。每条轻链通常由轻链可变区(V_L)和轻链恒定区(通常包含1个结构域，C_L)组成。

在本发明上下文中术语“抗体复合物”系指免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子片段、或者两者之一的衍生物，其具有在通常生理条件下长时间特异性结合抗原的能力，结合时间例如至少约30分钟，至少约45分钟，至少约1小时，至少约2小时，至少约4小时，至少约8小时，至少约12小时，约24小时或更长，约48小时或更长，约3、4、5、6、7或更多天等等，或者任何其它相关功能限定的时间(例如足以引发、促进、增强、和/或调节与抗体结合抗原相关的生理反应的时间)。

免疫球蛋白分子重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体(Abs)的恒定区可能介导免疫球蛋白结合宿主组织或因子，其包括免疫系统的多种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。