[发明专利]一种基于白蛋白假酯酶水解反应的特异性荧光探针及应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种基于白蛋白假酯酶水解反应的特异性荧光探针及应用。

背景技术

人血清白蛋白（human serum albumin，HSA）是血浆中含量最丰富的蛋白质，约占到血浆中蛋白总量的50-60%【Biochem Pharmacol.2005Nov25;70(11):1673-84.】。在体液中人血清白蛋白可以运输脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和许多治疗分子等，同时能维持血液正常的渗透压。人血清中白蛋白的正常值范围为34-54g/L【Nlm.nih.gov.Retrieved2010-05-12.】。但多种疾病，比如肝病（尤其是肝硬化）、肾病综合症、肿瘤、蛋白丢失性肠病、烧伤以及营养不良等会导致血清白蛋白的水平下降，而高蛋白饮食以及慢性脱水则会造成白蛋白水平升高。因此人血中白蛋白含量的定量测定已被临床用于疾病相关诊断，如果人体白蛋白的含量较正常范围值低很多时就需要给患者注射人血清白蛋白。大量临床实践已证实，监测血清白蛋白水平对于肝病或肾病患者的早期诊断以及疾病的愈后都有十分重要的诊断参考价值。更为重要的是，尿液中出现微量白蛋白一般可作为肾脏疾病（像是糖尿病、高血压、链球菌感染后的肾小球肾炎）、血管内皮功能障碍、心脏疾病以及静脉血栓栓塞的标志物及诊断指标。下表1给出了人体微量蛋白尿诊断值的正常范围。

表1微量蛋白尿诊断值

目前，白蛋白的检测和定量方法包括：电泳法、免疫法和染料结合法等方法。其中电泳法耗时耗力，特异性较差，易造成白蛋白浓度的高估【Clinical Chemistry:Theory,Analysis,Correlation,Mosby,5^th edition,2009.】。而免疫法虽然其特异性较好，但成本较高，因此目前临床应用较少。染料结合显色法应用相对较为广泛，但该方法是基于染料小分子与白蛋白部分区域的结合作用或个别氨基酸的修饰作用，机体部分组织蛋白也可与染料小分子发生类似作用，因而其特异性无法保障。溴甲酚绿和溴甲酚紫作为简单、便宜且特异性相对较好的两种染料分子，在临床上被较多的用来定量白蛋白。但由于其灵敏度较低【Clinical Chemistry:Theory,Analysis,Correlation,Mosby,5^th edition,2009.】、无法保证定量的准确性，常出现高估【J Clin Pathol.2003,56,780.】或低估现象【Clin Chim Acta.1986,155,83.】，且不可避免受到生物样品中的非特异性干扰【Clin Chem.,2009,55,583.】。因而，开发一种简单易操作、特异性高、准确可靠的白蛋白定量方法十分必要。

近年来，国内外学者发现白蛋白还具有催化功能，其可催化具有酯键结构的化合物发生类水解反应（Biochem Pharmacol2010;79(5):784-91&J Biol Chem2008;283(33):22582-90），反应后其自身部分游离氨基酸与酯类分子结构中的羧酸基团形成共价键，同时释放出含有游离酚羟基的一分子水解产物。葛广波等人也发现部分小分子可被白蛋白特异性催化发生类酯酶水解反应，如GLP-1受体激动剂Boc5在人体内仅可被白蛋白催化，而人体其它酯酶并不参与该化合物的水解(Eur.J.Pharm.Sci.2013;48:360–9)。以上国内外新近研究提示我们可针对白蛋白的类酯酶活性设计并开发其特异性的荧光探针底物分子，用于白蛋白的活性评估及定量分析。

本发明提供了一种N-正丁基-4-羟基-1,8-萘酰亚胺母体C-4位羟基取代的联苯甲酰酯类衍生物作为人血清白蛋白荧光探针底物的应用，其经白蛋白的假酯酶活性水解后可生成荧光发射波谱不同于原型的水解产物。该水解反应具有选择性高、代谢产物易检测等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于白蛋白假酯酶水解反应的特异性荧光探针分子及应用；利用该探针分子，检测人血清、血浆或尿液中白蛋白含量，通过检测样本中的荧光强度值来计算其中的白蛋白浓度；其原型和水解产物的荧光发射波长具有明显差异，且产物更易检测。