[发明专利]一种利用温度诱导双水相体系分离纯化芦丁的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用温度诱导双水相体系分离纯化芦丁的方法，属于生物化工技术领域。

背景技术

芦丁是黄酮类化合物，易溶解于热水、热乙醇中。以往提取芦丁时通常采用的方法是碱提取酸沉淀法。该方法是利用芦丁具有酸性，可与碱成盐而溶于水，加酸使成酸性后，其游离析出的原理，再经重结晶得到较纯的芦丁。该方法虽然多年来一直被视为较理想的方法，但由于是加热提取，常有一定的水解产物存在，产率较低(一般为9％～13％)。

专利文献CN101081859公开的一种芦丁提取方法，芦丁粗品用乙醇和醋酸乙酯的混合物搅拌，过滤，将上述滤液进行吸附，洗柱，浓缩洗脱液回收乙醇，离心过滤，烘干。专利文献CN1410423公开的一种提取芦丁的工艺，将芦丁溶剂提取，溶剂为甲醇、乙醇、丙酮或甲醛，提取滤液用吸附柱进行吸附，吸附柱为聚酰胺柱、氧化铝柱、凝胶柱、葡聚糖凝胶柱、纤维素粉柱、硅胶柱、大孔吸附树脂柱、离子交换树脂柱，用乙醇、甲醇、蒸馏水、甲醛中的一种或两种洗柱，洗脱液经蒸馏浓缩回收溶剂，离心过滤，80℃以下烘干得精品芦丁。

双水相萃取技术是一种新型的分离技术，亲水性聚合物水溶液在一定条件下可以形成双水相体系，通过被分离物在两相中分配不同，便可实现分离。该技术自研究开发以来，被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。双水相萃取技术设备投资少，操作简单，且不存在有机溶剂残存问题，因此在天然药物分离与提取中也有良好的应用前景。但是，由于聚合物回收困难，所以在一定程度上阻碍了双水相技术的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用温度诱导双水相体系分离纯化芦丁的方法，该方法经济、环保、低能耗，且能最大程度地获得高纯度芦丁，并能应用于工业化生产。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种利用温度诱导双水相体系分离纯化芦丁的方法，该方法包括以下步骤：

(1)提取芦丁粗品：将槐米粉碎后经饱和石灰水浸泡30～40min，再经频率20kHz的超声提取20～60min，过滤；药渣重复提取一次，合并两次滤液，向滤液中加入盐酸调节pH值为3～4，过滤析出的沉淀，沉淀经少量的水洗涤三次，在60℃以下干燥即得芦丁粗品；

(2)双水相分离：将环氧乙烷-环氧丙烷共聚物和水按体积比1～3∶1～4混合，然后向其中加入盐，混合均匀，所得溶液中盐的浓度为0.1～0.2g/mL，向溶液中按2.0～5.0mg/mL的量加入芦丁粗品，混合均匀后，以转速为1000～2000r/min离心分离2～5min，分离水相和富含环氧乙烷-环氧丙烷共聚物的有机相，芦丁在有机相富集，杂质在水相富集；

(3)温度诱导双水相分离：将步骤(2)得到的有机相在50～70℃水浴10～30min，溶液自动分成两相，以转速为1000～2000r/min离心分离3～5min，分离有机相和水相，芦丁在水相富集，环氧乙烷-环氧丙烷共聚物在有机相富集并得以回收；

(4)浓缩干燥：将步骤(3)得到的水相冷却至室温，放置过夜，析出结晶，过滤得到芦丁纯品。

在本发明的方法中，常温下环氧乙烷-环氧丙烷共聚物(EOPO)与盐水溶液形成双水相体系，将芦丁富集到EOPO相。由于EOPO具有较低的浊点，升高EOPO相温度，当温度上升至EOPO的浊点温度以上时，溶液自动分成水相和有机相，芦丁再次分配到水相，而富含EOPO的有机相得以回收。

其中，所述步骤(1)中的槐米粉碎至30～60目。所述步骤(2)中的EOPO平均分子量优选为2000～3000。所述的盐为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾或无水硫酸钠。EOPO与水的体积比优选为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、2∶3、3∶2或3∶4。

在温度诱导双水相分离过程中，操作环境始终保持在EOPO的浊点以上的温度，即离心分离过程中的体系温度保持在50～70℃，优选控制为60℃，离心分离过程可以分两次操作。

本发明的优点在于：

本发明采用EOPO/盐双水相分配结合温度诱导相分离从天然植物槐米中提取芦丁，与以往采用的聚乙二醇的双水相体系分离纯化过程相比，双水相分相迅速，且没有乳化层，同时富含EOPO的一相可以回收并循环使用，工艺环保、操作简单、降低物耗。

本发明采用的EOPO的浊点与芦丁产物的溶解度匹配适当，所得芦丁产品纯度较高。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明做进一步说明。以下实施例中所使用的试剂均为试剂级。

实施例1