[发明专利]抗体表达载体的构建方法

权利要求书

1.一种抗体表达载体的构建方法，在将表达载体p3MH改造为PAL过程中，使用两种DNA操作，其特征在于，包括以下步骤：

(1)表达载体的构建；

(2)噬菌体的制备和滴定；

(3)抗体基因的细胞内重组；

(4)酶联免疫吸附剂测定。

2.根据权利要求1所述的抗体表达载体的构建方法，其特征在于，所述表达载体p3MH为本实验室在pCOMB3H的基础上改造而成。

3.根据权利要求1所述的抗体表达载体的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：在载体中插入人工合成的寡核苷酸和通过PCR介导的定位突变改造载体中的特定序列。

4.根据权利要求1所述的抗体表达载体的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括：挑选含有适当载体的单集落XL1-BLUE菌，接种到含氨苄青霉素和葡萄糖的培养基中。

5.根据权利要求1所述的抗体表达载体的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)具体包括：挑选单集落BS1365菌，在含有卡那霉素和葡萄糖的培养液中生长至对数增长期，通过稀释铺盘计数每毫升所含细菌数，将两种噬菌体混合。

6.根据权利要求1所述的抗体表达载体的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)具体包括：将HbsAg用碳酸盐溶液稀释，搁置12小时，假如待测噬菌体样本，在37度下孵育一小时，加OPD底物显色，读取A490值。

7.根据权利要求2所述的抗体表达载体的构建方法，其特征在于，PCR介导的定位突变的操作步骤为：设计合成含有预期突变序列和适当限制性内切酶消化后，与相同内切酶消化的载体常规连接，连接物转化感受态细菌，铺盘选单集落提取质粒，用内切酶分析鉴定正确。