[发明专利]一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法

权利要求书

1.一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法，其特征在于，用氨水控制pH不小于7，当溶氧反弹时开始指数流加方式补料；至诱导浓度时，添加甘氨酸和CaCl₂，并开始恒速流加补料液。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，以谷氨酰胺转胺酶酶原突变体E62D-tag1为出发菌株，所述谷氨酰胺转胺酶酶原突变体E62D-tag1构建方法如下：1）通过PCR或化学全合成的方法获得Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062，得到谷氨酰胺转胺酶基因序列及其上下游序列，序列如Genbank：EU477523所示，克隆到表达载体；2）通过缺失突变获得Del1-4谷氨酰胺转胺酶突变体；3）以在步骤2）获得的突变体基础上，通过定点突变对E62进行突变，获得突变体Del1-4/E62D谷氨酰胺转胺酶突变体；4）在步骤3）获得的突变体基础上，融合tag1获得如SEQ ID NO.1所示的谷氨酰胺转胺酶突变体，转化大肠杆菌获得含有谷氨酰胺转胺酶突变体的工程菌。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述调整转速400-800r/min以维持溶氧不高于30%。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，指数流加比生长速率为0.2h^-1。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述诱导浓度OD₆₀₀为25-80。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述诱导浓度OD₆₀₀为50-80。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述发酵培养基：甘油8g/L，(NH₄)₂HPO₄6g/L，KH₂PO₄10.5g/L，柠檬酸1.7g/L，MgSO₄·7H₂O3.4g/L，微量元素10mL/L，pH7.0。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述补料液：甘油500g/L，蛋白胨15g/L，酵母粉30g/L，MgSO₄·gS₂O30g/L。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述诱导的同时添加150mmol/L的甘氨酸和20mmol/L的CaCl₂。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，在菌浓OD₆₀₀为50时，添加终浓度为75mmol/L甘氨酸和10mmol/L CaCl₂，当菌浓OD₆₀₀达到80时，向发酵液中再次加入终浓度为75mmol/L甘氨酸和10mmol/L CaCl₂。