[发明专利]一种检测生长素类农药或其结构类似物残留的方法

权利要求书

1.一种检测生长素类农药或其结构类似物残留的方法，其特征在于，该方法包括：

（1）、摘取苗期大豆叶片，立即把叶柄浸入液体样本中1小时，从液体样本中取出大豆叶片用于总RNA的提取；同时取清水处理大豆叶片作对照；

（2）、以SKIP16基因为内参，以GH3.6为标志基因，检测GH3基因在步骤1处理后的大豆体内的相对表达量；

如果相对表达量大于5以上，则说明书液体样本中含有生长素类农药或与生长素农药类似结构的农药残留。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的内参SKIP16基因的序列为在基因库中编号为CD397253所示的序列；GH3基因的序列为在基因库中编号为XM_003543231.1所示的序列；内参基因的引物序列为GAGCCCAAGACATTGCGAGAG和CGGAAGCGGAAGAACTGAACC；GH3基因的引物序列为： CTCCACCAAAGACTATGTTCTTGAAGA和CTCTTGAAGGTGTCAGGGTCGA。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，相对表达量为10-15。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，相对表达量为10或15。

5.根据权利要求1-4之一所述的方法，其特征在于，所述的生长素农药为苯氧羧酸类，二氯喹啉酸或多菌灵中的一种或几种。

6.根据权利要求5之一所述的方法，其特征在于，所述的生长素农药为二氯喹啉酸。

7.根据权利要求1-6之一所述的方法，其特征在于，相对表达量的检测采用Real-Time PCR，其中，内参基因的反应体系如下：总体积为25ul，其中ddH₂O: 10.5ul；SYBR Premix ex TaqTM (2×): 12.5ul；PCR-F (10uM): 0.5 ul；PCR-R (10uM): 0.5 ul；模板cDNA：1.0 ul；标志基因的反应体系如下：总体积为25ul，其中ddH₂O: 10.5ul；SYBR Premix ex TaqTM (2×): 12.5ul；PCR-F1 (10uM): 0.5 ul；PCR-R1 (10uM): 0.5 ul；模板cDNA：1.0 ul；反应条件：95℃，1min；45个循环：95℃，10sec；62℃ 25sec, 在55℃ to 95℃内收集荧光熔点曲线进行分析。

8.根据权利要求1-7之一所述的方法，其特征在于，所述的液体样本来自植物组织的提取液，或者环境土壤、水。

9.一种把GH3基因作为检测生长素类农药或其结构类似物残留的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其中，检测GH3基因的表达量来检测液体样本中是否含有生长素类农药或其结构类似物残留，其中检测方法如下：

（1）、摘取苗期大豆叶片，立即把叶柄浸入液体样本中1小时，从液体样本中取出大豆叶片用于总RNA的提取；同时取清水处理大豆叶片作对照；

（2）、以SKIP16基因为内参，以GH3.6为标志基因，检测GH3基因在步骤1处理过的大豆体内的相对表达量；如果相对表达量大于5以上，则说明书液体样本中含有生长素类农药或与生长素农药类似结构的农药残留。