[发明专利]饲料中聚醚类抗生素的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于抗生素的检测领域，特别涉及一种一次性同时定量测定多种聚醚类抗生素的方法。

背景技术

拉沙洛西钠、莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素同属聚醚类抗生素，是由放线菌发酵液产生的离子载体类抗生素。是目前家禽养殖中使用最广泛的抗球虫药物，主要添加于饲料中使用，可以增加饲料利用率，预防球虫病。但随着其在动物防病中的应用不断深入，球虫耐药性不断增强，因此用药量也不断增大，导致畜禽产品中的残留不断增加。因此有必要对饲料中聚醚类抗生素药物的添加量进行监测，保证人民群众的身体健康。

目前普遍采用液相色谱法进行抗生素检测。聚醚类抗生素中拉沙洛西钠自身含荧光基团，可在中性流动相中直接用荧光检测器检测。而聚醚类抗生素莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素均无发色团，在紫外吸收光谱中呈末端吸收，不能直接检测。但它们结构中含有羧基和羟基，可与芳醛发生羟醛缩合反应，生成有色化合物后用紫外检测器检测。但这种反应都需要在高温高酸的环境下进行，目前文献报道所采用的流动相都是：甲醇或乙腈与甲酸或冰醋酸、磷酸溶液的酸性混合相溶液。而拉沙洛西钠在这种反应环境下会产生分解并且不能反应得到理想的发色基团，造成不能检测。目前未见一次性同时检测饲料样品中聚醚类抗生素拉沙洛西钠、莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素含量的相关文献报道，实际操作中这四种聚醚类抗生素是采用不同方法将样品分别检测，此方法步骤繁琐且增大检测工作量。

发明内容

本发明确定了一种新的酸性流动相，并串联了高效液相色谱器和柱后衍生反应设备、荧光检测器、紫外检测器，可同时一次性分析检测饲料中拉沙洛西钠、莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素的含量。此检测方法灵敏度高、特异性强、快速易于操作，可用于微量检测。

一种饲料中聚醚类抗生素的检测方法，其特征在于，通过混合酸性流动相可同时使拉沙洛西钠、莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素在色谱分离柱上分离；具体检测步骤如下：

1）向2g粉末状饲料样品中加入10ml体积比为10%的甲醇溶液，于涡旋混合器上震荡5min，静置10min后以5200r/min转速离心10min，取上清液，重复上述提取步骤一次，将两次所得上清液用氮气吹干得残渣，用1ml体积比为9:1的甲醇与水的混合液溶解所述残渣后过0.22μm微孔滤膜，得到样品滤液；

    2）混合酸性流动相经脱气机去除空气后通过液相泵经安全开关流入高效液相色谱仪，流速为0.7ml/min，柱温40℃，通过加样器加入步骤1所述样品滤液10μl；

    3）对步骤2中经色谱柱分离后的物质进行荧光检测，设定荧光检测器激发波长为310nm，发射波长为420nm，获得拉沙洛西钠的检测结果；

    4）将步骤3经荧光检测后的混合液通过反流保护器导入体积为0.1ml的反应器A中；

    5）在反应器A中，通过衍生泵A以0.3ml/min的速度向步骤3所述混合液中加入衍生试剂A，反应温度为室温，所述衍生剂A为浓硫酸与甲醇按体积比4：96混合所得；

    6）在体积为1.4 ml的反应器B中通过衍生泵B以0.3ml/min的速度向步骤5所述混合液中加入衍生剂B，反应温度为90℃，所述衍生剂B为香兰醛与甲醇按重量/体积比6:95混合所得；

    7）将紫外检测器波长设为520nm，对步骤6所述反应后溶液进行检测，获得莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素检测结果，检测后的混合液经背压调节器，流入废弃液收集瓶。

 本发明优选为所述混合酸性流动相为甲醇与5%的乙酸以体积比为9:1混合所得。

优选为步骤2所采用的色谱分离柱为Z0RBAX SB-C18型填充柱。

优选为安全开关设置在510psi时开启。

 优选所述背压调节器设定为100psi。

本发明的优点在于：

1）本发明使用的混合酸性流动相同时使拉沙洛西钠、莫能菌素、盐霉素和甲基盐霉素在色谱分离柱上分离，满足一次性同时定量定性测定饲料样品中多种聚醚类抗生素含量要求，减少采用不同检测方法，分开处理检测样品的工作量，节约时间，检测结果准确可靠；

2）采用安全装置保护色谱仪，所述安全开关只有在色谱仪的分析柱前端压力达到一定压力时，才允许柱后反应系统启动操作；反流保护器为单向阀，防止在泵关闭状态时出现试剂虹吸返流损害色谱仪；

3）紫外检测器后接背压调节器，防止反应器B中温度较高的流动相在检测器的流通池内爆沸或产生气泡，确保反应安全。

附图说明

图1 为本发明实施例的检测流程框图。