[发明专利]一种副溶血弧菌VP核酸恒温扩增方法

权利要求书

1.一种副溶血弧菌VP的非诊断目的的恒温扩增方法，其特征在于，所述恒温扩增方法包括步骤：在反应体系中进行扩增，所述的反应体系中含有扩增副溶血弧菌VP的特异性引物对，所述引物对包括：

T7引物：序列如SEQ ID NO:3所示；和

nT7引物：序列如SEQ ID NO:4所示；

所述的反应体系中包括VP竞争性内标，并使用同一对特异性引物；VP竞争性内标的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；

所述反应体系还包括副溶血弧菌VP的捕获探针，所述VP的捕获探针可特异性捕获VP竞争性内标；所述捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述反应体系还包括副溶血弧菌VP的检测探针和VP内标检测探针；所述检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述内标检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

2.如权利要求1所述的恒温扩增方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：在扩增反应过程之中或之后，检测副溶血弧菌VP的特异性探针和内标检测探针发出的荧光信号。

3.一种副溶血弧菌VP的非诊断性检测方法，其特征在于，所述恒温检测方法包括：

用如权利要求1中所述的扩增方法扩增待测样品和竞争性内标；和

在扩增反应过程之中或之后，检测副溶血弧菌VP的特异性探针和内标检测探针发出的荧光信号。

4.一种副溶血弧菌VP的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(a)第一容器，以及位于所述容器内的恒温扩增副溶血弧菌的特异性引物对，所述引物对为：

T7引物：序列如SEQ ID NO:3所示；和

nT7引物：序列如SEQ ID NO:4所示；

(b)第二容器，以及位于所述容器内的VP内标序列，VP内标的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；

以及使用说明书；还含有以下组分：

(c)核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的捕获探针；

(d)核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的检测探针；和

(e)核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示内标检测探针。

5.一种恒温扩增副溶血弧菌的特异性引物探针组，其特征在于，包括：

(a)恒温扩增副溶血弧菌的特异性引物对：

T7引物：序列如SEQ ID NO:3所示；和

nT7引物：序列如SEQ ID NO:4所示；

(b)核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示的竞争性内标；

(c)核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的捕获探针；

(d)核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的检测探针；和

(e)核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示内标检测探针。

6.如权利要求4所述的试剂盒或权利要求5所述的引物探针组的用途，其特征在于，对鲜冻水产品及腌制食品样本中是否存在副溶血弧菌VP进行定性检测，和/或对鲜冻水产品及腌制食品样本中是否存在副溶血弧菌VP活菌进行判定。