[发明专利]一种黑曲霉组成型表达元件、表达载体、重组黑曲霉及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种黑曲霉组成型表达元件，其特征在于，所述表达元件由黑曲霉转录延伸因子基因启动子和黑曲霉转录延伸因子基因终止子组成；所述黑曲霉转录延伸因子基因启动子由1490、990或690个碱基组成，序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示；所述黑曲霉转录延伸因子基因终止子由1022个碱基组成，序列如SEQ ID NO.5所示。

2.由权利要求1所述黑曲霉组成型表达元件构建表达载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取黑曲霉的基因组DNA，设计引物，利用PCR技术，并以黑曲霉基因组DNA为模板，扩增并克隆长度为1490、990或690个碱基的黑曲霉转录延伸因子基因的启动子和长度为1022个碱基的终止子，分别命名为P_tef1490、P_tef990、P_tef690、和T_tef；

2）将Amds基因通过kpnI和XhoI内切酶克隆进入pbluescript载体中，获得中间载体一；将P_tef基因片段利用XhoI和HindIII内切酶克隆进入上述中间载体一中，获得中间载体二；将T_tef基因片段利用XbaI和NotI克隆进入中间载体二，获得黑曲霉表达载体pTef。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述引物序列如下：

4.权利要求2或3所述方法构建的表达载体。

5.由权利要求4所述表达载体构建重组黑曲霉的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将脂肪酶calb基因克隆到黑曲霉表达载体pTef中，使用内切酶为EcoRI和XbaI，获得calb表达载体pTef-calb；

2）将pTef-calb转化黑曲霉原生质体，筛选阳性重组菌株，即得到重组黑曲霉GAP3-calb。

6.权利要求5所述方法构建的重组黑曲霉。

7.权利要求6所述重组黑曲霉在制备工业酶制剂或药用蛋白质中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述工业酶制剂为脂肪酶、蛋白酶、植酸酶或木聚糖酶。