[发明专利]一种糖尿病预测标志物-纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)化学发光定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种纤维胶凝蛋白-3化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法，其特征在于，所述试剂盒包括：

1)纤维胶凝蛋白-3校准品；

2)碱性磷酸酶标记抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体工作液；

3)纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体包被的固相载体工作液；

4)清洗液；

5)化学发光底物。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的固相载体为磁性微粒，大小为200nm～3μm，磁性微粒表面的活性基团为-COOH。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物的主要成分为1，2-二氧环乙烷类衍生物或APS-5。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述1，2-二氧环乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧环乙烷、AMPPD(3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧环乙烷二钠盐)、CSPD、CDP-star或Lumigen PPD。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述纤维胶凝蛋白-3校准品溶液内含有的稳定剂为1％的干酪素钠。

6.一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)配制纤维胶凝蛋白-3校准品；

2)用纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体包被固相载体，配制工作液；

3)用碱性磷酸酶标记纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体，配制工作液；

4)配制清洗液；

5)配制化学发光底物；

6)分装上述纤维胶凝蛋白-3校准品、纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体包被固相载体工作液、碱性磷酸酶标记纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体工作液、清洗液以及化学发光底物；

7)组装为成品。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体工作液的制备方法包括以下步骤：

1)用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)将琥珀酰亚胺配制为10mg/ml的溶液；

2)配制0.1M pH8.0±0.05的Tris缓冲液，配制方法为称取1211.4mg Tris，加入约80g纯化水，充分混匀溶解，用4M盐酸溶液或4M氢氧化钠溶液调整溶液pH值到8.0±0.05，之后补加纯化水，将溶液定重在100g；用配好的0.1M pH8.0±0.05的Tris缓冲液溶解碱性磷酸酶，制备出浓度为2mg/ml的碱性磷酸酶溶液；

3)将2mg/ml的碱性磷酸酶溶液与10mg/ml的琥珀酰亚胺溶液按照体积比为1∶0.4的体积比混合，在室温条件下反应10-20分钟，得到碱性磷酸酶的活化产物。

4)用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)将亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐配制为10mg/ml的溶液；

5)用配好的0.1M pH8.0±0.05的Tris缓冲液溶解抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体，制备出浓度为2mg/ml的抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体的溶液；

6)将2mg/ml抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体的溶液与10mg/ml的亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐按照体积比为1∶0.4的体积比混合，室温反应10-20分钟，得到抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体的活化产物。

7)将两种活化产物按照1∶1的体积比混合，室温反应16-24小时后使用分子筛层析方式得到纯度较高的酶标记的抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体连接物。

8)将上述碱性磷酸酶连接物与0.1M Tris，5％BSA，0.9％NaCl，PH值为8.0±0.5的溶液可按照0.5-2μg/ml的碱性磷酸酶连接物浓度配制成工作液。