[发明专利]一种糖尿病预测标志物-纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)化学发光定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种糖尿病早期诊断标志物-纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)化学发光定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

近30年来，我国糖尿病患病率显著增加。1980年全国14省市30万人的流行病学资料显示，糖尿病的患病率为0.7％。2007-2008年，在中华医学会糖尿病学分会组织下，全国14个省市进行了糖尿病的流行病学调查。结果显示我国20岁以上的成年人糖尿病患病率为9.7％。对于糖尿病患者而言，早期发现、早期确诊和早期治疗糖尿病是让他们恢复健康的关键，要实现上述目标，就需要找到合适的标志物以实现糖尿病的早期发现，从而进一步实现糖尿病的早期确诊和早期治疗；因此，早期诊断和治疗为目的去研究和寻找能够用作预测和诊断糖尿病的蛋白质分子标记物具有十分重要的意义。

近年来人们越来越倾向将糖化血红蛋白(HbAlc)作为筛查糖尿病高危人群和诊断糖尿病的一种方法。但HbAlc检测目前在我国尚不普遍，而且我国HbAlc检测方法的标准化程度不够，HbAlc测定的仪器和质量控制尚不能符合目前糖尿病诊断标准的要求。此外，中国人群中HbAlc诊断糖尿病的切点是否与国际上一致还尚待研究证实。基于以上原因，目前尚不推荐在我国采用HbAlc诊断糖尿病。但是近来出现了很多关于纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)应用的报道，报道显示Ficolin-3表达水平与糖尿病有很大关系，Ficolin-3在糖尿病病人血清中的表达水平高于正常健康对照血清中的表达水平。并最终明确Ficolin-3在糖尿病领域的重要发现为糖尿病的早期发现、及时干预提供了必要手段，同时也为未来糖尿病的有效治疗提出进一步探索的方向。

标记免疫分析是一大类高特异性检测技术的总称，因其具有许多独特优点，已广泛应用于基础医学和临床各领域。它们的基本原理相同，仅依标记物的不同而最终测量所发出的信号而异。虽然文献报告的方法已有10余种，但有推广应用价值或已被广泛应用的主要有：放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和化学发光免疫分析(CLIA)等。放射免疫分析因使用放射性核素，污染环境，有效期短，测量时间长等自身缺点难以实现自动化，限制了进一步发展。酶免疫分析因其存在所发信号时间短的缺点，现阶段化学发光免疫分析法占主导地位。根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为：化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析

目前纤维胶凝蛋白-3诊断试剂盒国内较少，国外试剂盒基本上是用传统的酶联免疫(ELISA)方法进行测定且大多都应用于研发方面。性能方面其检测范围均偏窄(检测最高限均小于1μg/ml)，而根据文献记载，目前针对糖尿病检测用纤维胶凝蛋白-3的临床正常值在7-53μg/ml，因此如果将上述ELISA试剂盒应用于糖尿病的诊断，将需要对样本进行大浓度稀释，会大大增加用户操作的复杂程度。同时由于未解决纤维胶凝蛋白-3校准品系列溶液不稳定的问题，因此国内外厂家的试剂盒基本都要求在检测时使用试剂盒中的纤维胶凝蛋白-3高浓度液体，采用现用现配的方式获得校准品系列，这种做法进一步增大了用户的操作复杂性，且存在批间差异大、可控性差等问题。综上所述，目前市场上的纤维胶凝蛋白-3试剂盒采用酶联免疫法，存在线性范围过窄、不能覆盖临床的正常和异常值范围，校准品系列需检测前配制等缺陷，操作复杂性很高，批间差异大、可控性差，达不到临床应用的要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：解决上述市场上纤维胶凝蛋白-3试剂盒所存在的问题，提供出一种纤维胶凝蛋白-3化学发光定量检测试剂盒及其制备方法。此试剂盒具有线性范围宽、校准品系列稳定并可直接使用、操作方便，更符合临床应用需求的特点。

本发明的目的之一是在于提供一种糖尿病预测标记物-纤维胶凝蛋白-3(Ficolin-3)化学发光定量检测试剂盒。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。

根据本发明的试剂盒包括：

1)纤维胶凝蛋白-3校准品；

2)碱性磷酸酶标记抗纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体工作液；

3)纤维胶凝蛋白-3单克隆抗体包被的固相载体工作液；

4)清洗液；

5)化学发光底物。

根据本发明的试剂盒，其中，所述的固相载体为磁性微粒，大小为200nm～3μm，磁性微粒表面的活性基团为-COOH。