[发明专利]一种建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法

权利要求书

1.一种建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）人工授粉：选取生长健壮且带叶艺或花艺的建兰（Cymbidium ensifolium）为亲本，花开2～10天内进行人工授粉，授粉前后将整朵花套授粉袋，授粉后将亲本的唇瓣去掉；

（b）无菌播种和种子预处理：待杂交蒴果7-8分成熟且未开裂时采下，消毒处理，将消毒后的蒴果在无菌纸上纵切，将其粉末状的种子悬浮于无菌水中，超声清洗5～10min，然后将清洗后的种子悬浮液均匀滴播在种子萌发培养基培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，种子在萌发培养基上萌发形成根状茎，所述的种子萌发培养基为：每升含有肌醇80-120mg、萘乙酸0.5-2.0mg、椰子汁50-200ml、香蕉汁50-100g、活性炭1-2g、蔗糖15-20g、琼脂5-6g，其余为ZJ1培养基，pH 5.5～5.7；

（c）根状茎繁殖：将根状茎培养在增殖培养基上培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，根状茎大量增殖，所述的增殖培养基为：每升含有肌醇80-120mg、萘乙酸0.2-2.0mg、苄氨基腺嘌呤0.5-3.0mg、活性炭1-2.0g、香蕉50-150g、蔗糖10-20g、琼脂5-6g、其余为MS培养基，pH 5.5～5.7；

（d）根状茎分化芽：将步骤（c）得到的长1～2cm的根状茎培养在分化芽培养基上，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，根状茎上分化出芽，所述的分化芽培养基为：每升含有肌醇80-120mg、萘乙酸0.05-1.0mg、噻苯隆0.5-2mg、椰子汁50-150ml、蔗糖10-20g、琼脂5-6g，其余为ZJ2培养基，pH 5.5～5.7；

（e）壮苗生根培养：将根状茎分化而得的芽接种培养在壮苗生根培养基中培养，培养温度26±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间12小时/天，所述的壮苗生根培养基为：每升含有肌醇80-120mg、萘乙酸0.05-2.0mg、吲哚丁酸0.05-1.0mg、蛋白胨0.5-2.0mg、椰子汁50-100ml、香蕉汁50-100g、活性炭0.5-2g、蔗糖10-20g、琼脂5-6g，其余为ZJ2培养基，pH 5.5～5.7；

（f）试管苗移栽：当步骤（e）的苗长至6-9cm高且有2-4条根时，在自然光下炼苗15～30天，然后取出植株洗净根部的培养基，移入混合栽培基质中，所述的混合栽培基质为：兰石：树皮：木屑质量比为1：0.5～1：0.5～2，移栽后马上消毒，常规培养管理，由此得到种苗；

所述的ZJ1培养基为每升含有：硝酸铵160-200毫克，磷酸二氢钾80-100毫克，氯化钾160-200毫克，硫酸镁80-100毫克，硝酸钙80-100毫克，硫酸锌1-3毫克，硼酸1-3毫克，硫酸锰0.1-0.5毫克，硫酸铜0.03-0.05毫克，氯化镍0.03-0.05毫克，碘化钾0.01-0.05毫克，硫酸亚铁16-20毫克，维生素C 30-50毫克，烟酸8-10毫克，盐酸硫胺素3-5毫克，盐酸吡哆醇0.3-0.5毫克，谷氨酸0.3-0.5毫克，钴胺素0.5-1毫克，视黄醇1000-3000I.U，钙化醇800-1000I.U，其余为水；

所述的ZJ2培养基为每升含有：硝酸铵200-250毫克，磷酸二氢钾100-120毫克，氯化钾200-250毫克，硫酸镁100-120毫克，硝酸钙100-120毫克，硫酸锌2-6毫克，硼酸2-6毫克，硫酸锰0.2-1.0毫克，硫酸铜0.06-0.1毫克，氯化镍0.06-0.1毫克，碘化钾0.06-0.1毫克，硫酸亚铁20-25毫克，维生素C 30-50毫克，烟酸8-10毫克，盐酸硫胺素3-5毫克，盐酸吡哆醇0.3-0.5毫克，谷氨酸0.3-0.5毫克，钴胺素0.5-1毫克，视黄醇1000-3000I.U，钙化醇800-1000I.U，其余为水。

2.根据权利要求1所述的建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法，其特征在于，所述的步骤（b）的消毒处理为：用体积分数75%酒精擦洗果实表面，再用质量分数0.1%升汞溶液或质量分数1%～2%的次氯酸钠溶液消毒15～20min，无菌水冲洗4-5次。

3.根据权利要求1所述的建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法，其特征在于，所述的步骤（b）的超声清洗为在30℃，40KHz下振荡5～10分钟。

4.根据权利要求1所述的建兰的无菌播种和试管苗繁殖方法，其特征在于，所述的步骤（f）的移栽后马上消毒，其消毒为喷2000倍的多菌灵消毒。